摘 要

现代药理研究已经证实：积雪草苷具有抗肿瘤，抗抑郁，抗静脉功能不全，抗溃疡，抗静脉功能不全，创面愈合，神经功能恢复等多种药理活性。 同时具有抗病毒，免疫调节，心血管，抗炎等药理作用，具有明显的临床应用效果。 因此，本研究基于积雪草苷的治疗作用，但由于积雪草苷分子量大，细胞膜通透性差，不易穿透皮肤表皮，难以发挥局部用药的治疗作用。 为了克服这个问题，我们使用脂质体作为载体将制剂包封到靶向的脂质体制剂中。由于脂质体磷脂双分子层结构与皮肤细胞膜的相似性，积雪草苷位于脂质体的脂质双分子层之间， 分裂组具有改善的稳定性，渗透性和亲水性，并且可用于制备药物和化妆品， 特别是透皮交付系统。 同时提高生物利用度，延长作用时间，更好地达到治疗目标，并减少不良反应。 本课题先对积雪草苷的理化性质、临床应用、当今已有的研究现状进行分析，然后对积雪草苷脂质体的制备方法，制备条件和稳定性进行了深入研究。

关键词：积雪草苷;脂质体;积雪草苷脂质体;含量测定;表征;稳定性试验

Abstract

The main active component of Centella Asiatica in traditional Chinese medicine is Asiaticoside. Modern pharmacological studies have confirmed that it has many pharmacological activities such as anti-tumor, anti-depression, anti-venous insufficiency, anti-ulcer, anti-venous insufficiency, wound healing, and nerve function recovery. At the same time, it also has pharmacological effects such as anti-virus, immune regulation, cardiovascular, anti-inflammatory, and has obvious clinical application effects. Therefore, this study was based on the therapeutic effect of asiaticoside, but because of the large molecular weight of asiaticoside, cell membrane permeability is poor, it is difficult to penetrate the skin epidermis, and it is difficult to exert the therapeutic effect of topical medication. To overcome this problem, we used liposomes as carriers to encapsulate preparations into targeted liposome formulations. Due to the similar structure of the liposomal phospholipid bilayer and the skin cell membrane, asiaticoside is located between the lipid bilayers of the liposome, which has improved stability, permeability and hydrophilicity, and It can be used to prepare medicines and cosmetics, especially transdermal delivery systems. At the same time, increase bioavailability, prolong action time, achieve better treatment goals, and reduce adverse reactions. This topic first analyzes the physicochemical properties, clinical applications, and current research status of asiaticoside, and then conducts in-depth studies on the preparation methods, preparation conditions and stability of asiaticoside liposomes. .

Key words: asiaticoside；liposomes；asiaticoside liposome；determination of content；characterization；stability test

目 录

第一章 绪论 7

1.1积雪草苷 7

1.2积雪草苷的临床应用 7

1.3积雪草及其有效成分的制剂学研究现状 11

1.4脂质体技术 15

1.5本课题的研究内容与意义 16

第二章 积雪草苷含量测定的方法学建立 18

2.1仪器与试剂 18

2.2空白脂质体的制备 20

2.3最大吸收波长的确定 20

2.3.1积雪草苷的紫外吸收 20

2.3.2空白脂质体的紫外吸收 20

2.4积雪草苷的含量测定方法的建立 21

2.4.1色谱条件 21

2.4.2溶液的配制 21

2.4.3标准曲线 22

2.4.4精密度试验 22

2.4.5回收率试验 23

2.4.6样品测定 24

第三章 积雪草苷脂质体的制备与表征 26

3.1脂质体的制备 26

3.1.1仪器与试剂 26

3.1.2积雪草苷脂质体的制备 26

3.1.3包封率的测定 26

3.2正交试验 27

3.2.1正交试验结果分析 27

3.2.2脂质体制备优选工艺验证试验 28

3.3脂质体的表征 29

3.3.1显微镜形态观察 29

3.3.2粒径及Zeta电位 29

3.4本章小结 30

第四章 积雪草苷脂质体的稳定性研究 31

5.1材料与方法 31

5.1.1仪器 31

5.1.2试药 31

5.1.3影响因素实验 31

参考文献 34

第1章 绪论

1积雪草苷

积雪草（Centella asiatica）是一种伞形科积雪草属植物。 在我国积雪草苷是传统药用植物具有悠久的历史和广泛的应用，其中大部分成分为三萜类化合物，其中积雪草苷（asiaticoside，积雪草苷）具有丰富的药理活性，临床作用广为人知^[1]。积雪草苷作为其主要为有效成分在应用前景上具有很大的发展价值。 近年来，大量研究证实，积雪草苷具有抗肿瘤，抗静脉功能不全，抗溃疡，伤口愈合，抗抑郁，神经功能恢复等多种药理活性。 它还显示心血管，免疫调节，抗炎，药理作用如抗病毒。 在本文中，我们回顾了近年来积雪草苷的药理作用及其作用机制。

1.2积雪草苷的临床应用

1.2.1抗肿瘤

癌症是现代人类生活和生活质量的主要杀手。研究表明，积雪草苷对各种癌细胞具有不同的药理作用，并具有多种机制。实验表明，积雪草苷可抑制肿瘤细胞的异常增殖，协同增强长春新碱等抗肿瘤药物的活性。使用MTT测定来确定积雪草苷对几种癌细胞系的增殖的作用[2]。结果显示，在亚细胞毒性水平上，积雪草苷增加B细胞淋巴瘤的磷酸化高于正常细胞。增殖抑制，特异性强。在这种抑制过程中，出现了一种新的活性细胞蛋白酶，表明可能存在一种全新的抑制机制。积雪草苷和长春新碱的组合显示出强烈的协同作用，并且组合疗法的抗肿瘤效果比长春新碱单独或积雪草苷更强。

1.2.1.1诱导细胞凋亡发挥抗肿瘤作用

研究发现，积雪草苷可以降低人黑素瘤细胞的活力，并在特定的时间和特定的剂量下诱导其凋亡。同时，积雪草苷显着增加细胞内活性氧浓度，增加其细胞内表达，并以剂量​​依赖性方式诱导凋亡蛋白酶活性的激活。值得注意的是，积雪草苷不增加人黑素瘤细胞突变体中存在的p53核蛋白的水平。这些结果表明，积雪草苷诱导的细胞凋亡是通过ROS增殖介导的，改变Bax / Bcl-2和胱天蛋白酶性的比率，不依赖于p53，并且在人类皮肤癌中显示出良好的临床治疗前景[3]。阻断肿瘤细胞中的DNA合成以发挥AT抑制Azoxymethane诱导的变体荚膜病变（ACF）和F344雄性小鼠肠肿瘤的抗肿瘤机制，显示结肠直肠癌中显着的早期ACF数目减少，而甲基化DNA的浓度加合物没有减少，随着ACF降低，5-溴-2-脱氧尿苷核苷标记也减少并增加结肠粘膜细胞的凋亡。在单剂量积雪草苷（10mg / kg体重）的情况下，小肠腺癌中的肿瘤细胞和肿瘤大小的发生率小于单独的氧化偶氮甲烷，并且存在显着差异（P lt;0.05）。在100mg / kg体重浓度下，小肠中的各种新细胞显着降低（P lt;0.05）。这一结果表明，积雪草苷通过抑制肿瘤细胞中DNA的合成来抑制氧化偶氮甲烷引起的ADF的产生，从而引发肿瘤细胞增殖速度的减慢，从而抑制癌变的趋势，预防和控制肿瘤的发生细胞。结肠肿瘤[5] 的抗肿瘤药理学的丰富性及其机制已成为研究的新发展。我们相信随着研究的深入，将会有更多的前景。