摘 要

本文的主要目的是制备高乌甲素脂质体凝胶，优化其处方和工艺，并对其相关性能进行评价。方法如下：采用乙醇注入法制备高乌甲素脂质体，通过正交试验优化处方工艺；利用马尔文动态光散射粒径测定仪测定其zeta电位和粒径，采用超速离心法分离游离药物和脂质体，紫外法测定脂质体中高乌甲素的包封率。以卡波姆为基质制备凝胶，进行体外释放实验，研究凝胶的稳定性。最终得到的最佳处方为：胆固醇与磷脂的质量比为5:1，药脂比为30:1，缓冲液pH为7.40，用量为40mL，水化温度为60℃。制得的高乌甲素脂质体包封率为44.20%，平均粒径为314.7nm，zeta电位为-20.1mV。结论：乙醇注入法制备高乌甲素脂质体工艺简单可行，所制得的高乌甲素脂质体包封率尚可、粒径较小、稳定性好。高乌甲素脂质体凝胶缓释效果明显，应低温避光保存。

关键词：高乌甲素；脂质体凝胶；乙醇注入法；体外释放；稳定性

Abstract

Objective The aim is to prepare liposomal gel of lappaconitine,optimize the prescription and preparation progress,and evaluate relative performance.Method Liposomal of lappaconitine is prepared by ethanol injection method,and orthogonal design is adopted to screen the optimal conditions.The particle sizes and zeta potential are detected by Zetasizer Nano,while the encapsulation efficiency of lappaconitine liposome is determined by UV after the free drug is separated by Ultracentrifugation method.The gel is prepared with carbomer as substrate.In vitro transdermal experiments are performed to study the properties of the gel.Result The best prescription is as follows: The mass ratio of cholesterol to phospholipid is 5:1.The ratio of drug to lipid is 30:1.the buffer pH is 7.40,and the dosage is 40mL.The hydration temperature is 60℃.The encapsulation efficiency of the liposome is 44.20%.The average particle size is 314.7nm.The zeta potential is -20.1mV.Conclusion The ethanol injection method is simple and feasible,and the prepared liposome has the advantages of high encapsulation efficiency,small particle size and good stability.The sustained release effect of liposome gel is obvious,and it should be preserved at low temperature and without light.

Key Words:Lappaconitine;Liposome gel;Ethanol injection method;Transdermal permeation in vitro;stability

目 录

绪论 1

第1章 引言 2

1.1高乌甲素简介 2

1.2高乌甲素的临床应用 2

1.2.1 用于恶性肿瘤及其他顽固性疼痛的治疗 2

1.2.2 抗炎消肿、降温解热与局部麻醉作用 3

1.2.3 用于术后镇痛 3

1.2.4 抗心律失常作用 3

1.2.5 毒性与不良反应 4

1.3 高乌甲素的研究现状 4

1.4 脂质体简介 5

1.5 脂质体应用概况 5

1.6 课题的提出 6

第2章 仪器与试药 8

2.1 仪器 8

2.2 试药 9

第3章 高乌甲素理化常数及含量测定的研究 10

3.1 紫外吸收光谱 10

3.2 标准曲线的绘制 10

3.2.1 高效液相法 10

3.2.2紫外分光光度法 11

3.2.3 标准曲线的选取 12

3.3 精密度试验 13

3.4 回收率的测定 14

3.5 小结与讨论 14

第4章 乙醇注入法制备高乌甲素脂质体及其表征 16

4.1空白脂质体的制备 16

4.1.1 制备空白脂质体 16

4.1.2 空白脂质体的紫外吸收 16

4.2包封率的测定方法 17

4.3正交试验设计 17

4.4 载药脂质体的制备 18

4.5 脂质体表征 19

4.5.1脂质体形态 19

4.5.2粒径的测定 19

4.4.3 zeta电位的测定 20

4.5 讨论 20

第5章 高乌甲素脂质体凝胶的制备及其表征 22

5.1 凝胶基质的优选 22

5.1.1 凝胶简介 22

5.1.2 基质的优选 22

5.2 高乌甲素脂质体凝胶的制备 23

5.3 脂质体凝胶的表征 23

5.3.1 凝胶pH 23

5.3.2 体外释放度实验 23

5.3.3 稳定性研究 23

5.4 讨论 24

第6章 实验总结 25

致 谢 28

绪论

高乌甲素^[1](lappacon itine，LA)又称拉巴乌头碱、刺乌头碱，是从毛茛科乌头属植物高乌头Aconitum sinomontanumNakai中提取出来的一种二萜类生物碱，为非阿片类镇痛药，制成氢溴酸盐C₃₂H₄₄O₈N₂·HB r·H₂O(HL)后水溶性提高，临床上常使用高乌甲素的氢溴酸盐用于治疗中度以上的疼痛。且高乌甲素无成瘾性，具有高度安全性。

然而因为高乌甲素的水溶性差、对光照比较敏感，这些理化性质决定了高乌甲素传统剂型制剂的临床应用受到一定的限制，这使得新型制剂的研究成为一种趋势。

为了提高高乌甲素的水溶性及其稳定性，降低高乌甲素的毒副作用和提高其分散度，使其能够更加安全地使用，可将高乌甲素包裹在微粒给药系统中例如脂质体、微球、微乳等[^[1]]。而脂质体凝胶作为缓控释药物的载体，是临床上应用比较早，发展最为成熟的一类新型靶向制剂。所以本文通过乙醇注入法制备高乌甲素脂质体凝胶，并对其性能做出评价，达到保持高乌甲素的活性以及靶向给药的目的，以期望提高镇痛药物的药效和安全性，并解决成瘾性和毒性问题。

本文主要针对乙醇注入法制备高乌甲素脂质体凝胶的生产工艺进行研究分析，探讨乙醇注入法制备脂质体中高乌甲素的用量，胆固醇与卵磷脂的比例，磷酸盐缓冲液（PBS）pH值及用量等因素对高乌甲素脂质体包封率的影响，筛选出合适的脂质体制备处方和包封工艺，研究高乌甲素脂质体凝胶的成型工艺，并对其进行表征，对其稳定性能进行研究，为促进高乌甲素在临床上的应用提供理论基础和依据。

第1章 引言

1.1高乌甲素简介

高乌甲素(lappaconitine，LA)又称拉巴乌头碱、刺乌头碱，是从毛茛科乌头属植物高乌头（Aconitum sinomontanum Nakai）中提取出的一种二萜类生物碱，临床常用其氢溴酸盐。

高乌甲素的化学名称为（1_α，14_α，16_β）-20乙基-1，14，16-三甲氧基-乌头烷-4，8，9-三醇4-[2-（乙酰氨基）苯甲酸酯]，分子式为C₃₂H₄₄N₂O₈，分子量为584.64，结构式见图1.1。

图1.1 高乌甲素的结构式

高乌甲素是六面体柱状结晶，外观上无色透明。熔点224℃。高乌甲素的氢溴酸盐为白色柱状晶体，无臭，味苦，在水、甲醇中微溶，在乙醇、氯仿中溶解，分子式为C₃₂H₄₄N₂O₈•HBr•H₂O，熔点217℃～221℃。

高乌甲素为非阿片类镇痛药，用于医治中度以上疼痛，主要应用于头痛、牙痛、肩臂痛、颈椎痛、结石痛、外伤疼痛、胃溃疡疼痛、神经疼痛等各种疼痛以及术后疼痛等，药效维持时间长，无成瘾性、致突变和致癌作用，对机体的免疫系统也无积累、刺激，变态反应以及毒副作用，具有高度安全性。

临床表明，高乌甲素的局部麻醉作用与可卡因相同；而神经传导阻滞作用是可卡因的5.25倍，是普鲁卡因的13倍；浸润麻醉作用远远强于可卡因和普鲁卡因。此外，高乌甲素还具有降温、解热和抗炎消肿的作用。

1.2高乌甲素的临床应用

1.2.1 用于恶性肿瘤及其他顽固性疼痛的治疗

高乌甲素对溃疡病、胃炎、胃癌、肝癌、肺癌、乳癌等患者的临床治疗具有较好的镇痛效果，镇痛强度是氨基比林的7倍，与杜冷丁效果相当，而且药效维持时间长，是优良的非成瘾性镇痛药，无致畸胎、致突变作用，也不会产生积蓄中毒，对患者的肝肾功能、造血功能几乎无影响。临床使用剂量为0.15mg/kg-0.20mg/kg。张文亚等^[1]用高乌甲素和地塞米松两者的葡萄糖溶液，每天静脉滴注一次，结果发现，医治癌痛收到了令人满意的效果，25例癌痛患者均未发现出明显的不良反应。现代学者研究认为，高乌甲素的镇痛机制是：通过阻滞具有电压依从性的钠离子通道，抑制神经传导；抑制突触前膜对去甲肾上腺素的重摄取，使突触间的去甲肾上腺素含量增加；抑制传入纤维上D物质的释放而发挥镇痛作用。

1.2.2 抗炎消肿、降温解热与局部麻醉作用

高乌甲素作为一种非麻醉性镇痛药，抗炎消肿作用较强。刘铭佩、鞠洋等^[2]选择甲醛溶液致炎、鹿角菜胶致炎及佐剂性关节炎3种炎症性疼痛模型对高乌甲素的镇痛抗炎作用进行研究，结果表明，在3种炎症性疼痛模型中，高乌甲素均有明显的镇痛作用，说明高乌甲素具有抗急、慢性炎症性疼痛的作用，为临床用药提供了可靠的依据。该研究所采用的主要是紧张性的炎症性疼痛模型，它的产生部位主要在脑干以上脑区，包括间脑和大脑边缘系统，由此可以推测，高乌甲素对炎症性疼痛的镇痛部位很有可能在脑干以上脑区^[3]。高乌甲素用于局部麻醉，具有起效快、持续时间长的特点。猴长期注射次乌头碱猴停药后不会出现戒断综合症，这表明次乌头碱是一种不致瘾的止痛剂。

高乌甲素的抗炎消肿作用机制目前仍不清楚，多数研究推测其与非甾体抗炎药（non-steroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs）相似，通过抑制COX（环氧酶），干扰PGs（聚半乳糖醛酸酶）的合成；或者通过干扰某些细胞粘附分子的活性表达而发挥疗效。

1.2.3 用于术后镇痛

静脉推注高乌甲素可以用来治疗硬膜外术后镇痛^[4]，而且效果不错，镇痛效率可高达90%，并且没有发现任何不良反应。侯锐桦等^[1]使用高乌甲素贴片对进行隆乳术的患者进行镇痛治疗，结果发现，高乌甲素的贴片虽然起效慢，但维持时间长达72h，且无成瘾性，使用方便。许多文献报道，高乌甲素经硬膜外途径给药为术后用药的主要方式。倪振山等观察了高乌甲素经硬膜外注射进行术后镇痛的疗效和副作用，并与吗啡进行了对比，发现硬膜外注射小剂量咪唑安定复合高乌甲素可产生明显的镇痛作用，而且没有恶心、呕吐以及尿潴留等不良反应。根据实验结果分析镇痛的机制是高乌甲素直接作用于脊神经，通过与脊髓灰质的“吗啡样受体”结合，经血吸收后散瘀消肿、疏通经脉而发挥作用。

1.2.4 抗心律失常作用