摘 要

为准确鉴别石豆兰属药用植物及其混伪品，本研究应用DNA条形码技术对9种药用植物及其混伪品进行鉴定研究。通过对27份样品进行DNA提取，PCR扩增和双向测序获得ITS2序列。所得序列通过CodonCode Aligner软件进行质量分析和拼接后，再用MEGA5.1软件对所得数据进行分析比对，基于MEGA5.1中的K2P模型计算石豆兰属药用植物及其混伪品种内、种间遗传距离（K2P）以及构建邻接树(neighbor-joing tree,NJ tree)。结果表明：石豆兰属药用植物及其混伪品ITS2序列种内变异均小于种间变异，ITS2序列比对后长度为278bp，变异位点达到168个；且遗传距离显示物种种内平均K2P距离小于种间平均K2P距离，因此，本研究中石豆兰属药用植物及其混伪品基本可以区分开，但还应该对其准确性进行进一步研究。

关键词：石豆兰；混伪品；ITS2；DNA条形码；鉴定

Abstract

To accurately identify Bulbophyllum medicinal plants and their adulterants, this study DNA barcoding for nine medicinal plants and their adulterants identified studies. Through the sample DNA extraction, PCR amplification and direct sequencing obtained ITS2 sequence. The resulting sequence through CodonCode Aligner software quality analysis and stitching, and then MEGA5.1 software was used for analysis and comparison, the calculation MEGA5.1 the K2P model Bulbophyllum medicinal plants and their mixed Pseudo varieties, interspecific genetic distance (K2P) and neighbor-joining tree constructed (neighbor-joing tree, NJ tree). The results showed that: Bulbophyllum medicinal plants and their adulterants ITS2 sequence intraspecific variation were between less than intraspecific variation, ITS2 sequence alignment after a length of 262bp, variable sites reached 168; and the distance that was intraspecific average K2P distance far less than the average K2P distances between species, therefore, the present study Bulbophyllum medicinal plants and their adulterants can distinguish between basic, but it should be further studied as to its accuracy.

Key words：Bulbophyllum；Adulterants；ITS2；DNA barcoding；identify

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

1.1 石豆兰属药用植物概述 1

1.2 混伪品石斛属植物概述 1

1.3 DNA 条形码（DNA barcoding）技术概述 2

1.3.1 DNA条形码技术介绍 2

1.3.2 DNA条形码技术的发展及优势 3

1.3.3 DNA条形码技术的国内外研究现状 3

1.4 研究课题的提出 4

1.4.1 目的及意义 4

1.4.2 研究目标 5

1.4.3 研究内容 5

1.4.4 拟解决的关键问题 5

第二章 石豆兰属药用植物及其混伪品的条形码鉴定 6

2.1 引言 6

2.2 实验部分 6

2.2.1 实验材料 6

2.2.2 常用溶液配制 6

2.2.3 DNA提取 7

2.2.4 PCR扩增 8

2.2.5 琼脂糖凝胶电泳检测 10

2.2.6 测序 10

2.3 数据处理 10

2.3.1 种内变异分析 10

2.3.2 种间变异分析 11

2.3.3 种内种间遗传距离分析 11

2.3.4 石豆兰属药用植物及其混伪品邻接树（NJ树）鉴定 12

2.4讨论 13

第三章 结 论 14

参考文献 15

致 谢 17

第一章 绪论

1.1 石豆兰属药用植物概述

石豆兰属（Bulbophyllum）是兰科(Orchidaceae)石豆兰亚族下的三个属之一，全球大概有1000种，主要分布在亚洲、美洲和非洲热带地区，以东南亚最为繁多。目前，我国石豆兰属植物有98个种，主要生长在长江流域和中国中部地区以南各个省区，云南南部的石豆兰属植物最多。其中一些种在民间经常用作中草药，如麦斛、芳香石豆兰、伏生石豆兰、梳帽卷瓣兰等，具有滋阴降火、生津养胃的功效，以全草或假鳞茎晒干或鲜草来入药，主要用于治疗肺燥咳嗽、热病烦渴或者跌打损伤等症状。其中有15种石豆兰属植物常作民间药用，石豆兰属植物的药用价值已经得到了中药界的关注^[1-3]。

芳香石豆兰 B .ambrosia（Hance）Schltr. 又称肥猪草，别名为石枣子，生于海拔可达1300m的山地林中树上。全草都可以作为药用部分。具有清热的功效，主要治疗肺热咳嗽，广东民间常用6-15g煎汤内服用以治疗肝炎^[1]。