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摘 要

肺癌是亚洲人口中常见的肺源性恶性肿瘤，它也是患病率和致死率增速极快，对人们身体健康和生命危害最大的肿瘤之一。斑马鱼基因和人类基因相似，基因序列之间的匹配程度高达85%，具有基因同源性，是帮助我们分析人类病因的好帮手。把人类人肺癌中具有特殊性质的细胞株移植到斑马鱼的体内，可以用来评价估量肿瘤转移模型和筛选药物。本文以斑马鱼为动物模型，研究肺癌细胞株H1975在斑马鱼胚胎中脑转移潜能，目的在于探索斑马鱼异种移植模型是否能够准确地评价抗肿瘤药物的效果。结果表明，斑马鱼异种移植模型确实可以评价治疗肿瘤药物的效果，为其应用于其他更多抵抗癌症药品的研发提供了实验依据。

关键词：脑转移 奥希替尼 斑马鱼异种移植模型

Evaluation of Brain Metastasis Potential of Lung Cancer Cell Line H1975 in zebrafish Embryos

Abstract

Lung cancer is a general pulmonary cancer in the Asian population. zebrafish genes are similar to human genes, and the matching degree between gene sequences is up to 85%, which has gene homology, which is a good helper to help us analyze human etiology. Transplantation of human lung cancer cell lines with specific properties into zebrafish can be used to evaluate tumor metastasis models and screen drugs. A zebrafish model was used to study the H1975 of lung cancer cell lines in zebrafish potential of midbrain metastasis in embryos, the purpose is to investigate whether zebrafish xenograft models be able to correctly appraise the effectiveness of antitumor drugs. the results show that zebrafish xenograft models can indeed evaluate the efficacy of cancer drugs and provide experimental basis for their application to the development of more other cancer resistant drugs.

Keywords: Brain metastases; Oxitinib; Zebrafish xenograft model

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 引言 1

1.2 肺癌 1

1.2.1 肺癌的类型 1

1.2.2 肺癌的病因 2

1.2.3 肺癌的治疗 2

1.3 肺癌脑转移 3

1.4 斑马鱼异种移植模型 4

1.4.1 斑马鱼作为模式动物的优点 4

1.4.2 异种移植的优点 4

1.4.3 斑马鱼异种移植的优点 5

1.5 奥希替尼简介 5

1.5.1 奥希替尼的发展概况 5

1.5.2 奥希替尼最新研究进展 6

第二章 实验材料与方法 7

2.1实验试剂与仪器设备 7

2.1.1试剂耗材 7

2.1.2 实验仪器 8

2.2 实验方法 9

2.2.1 主要实验溶剂和药物的配制 9

2.2.2 实验动物 10

2.2.3 斑马鱼胚胎收取 10

2.2.4 建立H1975细胞株来源的斑马鱼异种移植模型 11

2.2.5 H1975细胞株脑转移潜能评估 11

2.2.6 奥希替尼在斑马鱼异种移植模型中的药效评估 11

2.3 图像获取 12

第三章 实验结果与讨论 13

3.1 实验结果 13

3.1.1 确定最佳斑马鱼胚胎注射位点 13

3.1.2 对H1975细胞株脑转移潜能进行评估 16

3.1.3 奥希替尼在H1975斑马鱼肺癌脑转移模型中的作用 16

3.2 讨论 17

第四章 结论 18

参考文献 19

致谢 22

第一章 文献综述

1.1 引言

肺癌是人类呼吸系统中常见的肺源性恶性肿瘤，近些年来肺癌的发病率一直在上升，同时它也是世界上致死率最高的一种恶性肿瘤。全球范围内每年约169万人死于肺癌,其中非小细胞肺癌 (NSCLC) 大约占所有肺癌的百分之八十,首次确诊时大约有百分之七十已经属于肺癌晚期，其中将近五分之二的末期非小细胞肺癌病患还会在患病过程中引发脑转移(BM), 导致治疗效果差，直接威胁到患者的生命健康，其中多为吸烟的男性腺癌病患,且5年生存率低于5%^[1]。脑转移是肺外复发最常见的部位,也是导致预后不良的重要因素，目前还没有有效预防的措施^[2]。斑马鱼肿瘤异种移植模型是抗肿瘤药物研发中一种新兴的实验技术^[3] ，应用于抗肿瘤药物的早期筛选实验^[4,5],本文以斑马鱼为动物模型,研究肺癌细胞株H1975在斑马鱼胚胎脑转移的潜能，探索奥希替尼在H1975斑马鱼肺癌脑转移模型中的作用，目的在于探索斑马鱼异种移植模型是否能够准确地评价出抗肿瘤药物的治疗效果，并检验常用的抗肿瘤药物在斑马鱼肺癌脑转移模型上的药敏性,为该模型应用于抗癌药物的研发提供实验依据^[6]。

1.2 肺癌

1.2.1 肺癌的类型

肿瘤发生的解剖学位置确定以后，可以分成中央型和周围型两种不同类型的肺癌。中央型肺癌以鳞状上皮细胞癌和小细胞癌居多，约占百分之七十五。周围型肺癌常发生在段支气管与肺泡上，大部分都是腺癌，约占百分之二十五。

世界卫生组织早在十多年以前就公布过关于肺癌的分类，为肺癌的治疗带来了非常大的帮助。1960年代发表的第一版中将肺癌分为小细胞肺癌（small cell lung carcinoma, SCLC）和非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）是肺癌组织学分类的第一个里程碑^[7]，这种差异在各种临床和治疗后的实践中是非常重要的。非小细胞肺癌可以分为鳞状细胞癌、腺癌和大细胞肺癌三种类型。鳞状细胞癌细胞体积大，最早出现在段和亚段支气管，因为分化足够的鳞状细胞癌发展缓慢，转移较晚，所以手术机会也就更多。肺腺癌是肺癌中最常见的类型，通常起源于外围肺组织，腺癌细胞形状不规则，具有明显的核仁和丰富的胞浆，这类癌细胞大部分还含有黏液，大多数肺腺癌都和吸烟有关。大细胞癌细胞体积大，形态丰富，具有非常明显的大核仁，多表现为周围型。这类癌细胞恶性程度大，但分化程度差，所以有很大的机会可以通过手术切除。小细胞肺癌不太常见，肿瘤细胞体积小，约占肺癌总发病率的百分之十五。这类癌症患者多为吸烟的男性，由于小细胞癌增殖快，常在大的呼吸道里迅速发展，很快就长的非常大，所以大部分患者在发现的时候就已经出现了全身转移。虽然刚开始放疗和化疗可以起到一定的作用，但后期手术切除的治疗效果并不好，病人恢复的情况不佳，小细胞癌往往很难被治愈。

1.2.2 肺癌的病因

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