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摘 要

本文主要研究了阿帕替尼（apatinib）对斑马鱼胚胎发育的影响，属于发育毒理学的研究范畴。本文首先介绍了斑马鱼及斑马鱼在发育毒理学应用的优势，接着对抗血管生成药物阿帕替尼进行了介绍:主要了解阿帕替尼的性质、代谢途径、用途，之后引出了该药物对胚胎发育影响所涉及的方面（死亡率、畸形率、孵化率、体长、心跳、血管等），从而确定给药后需要观察的参数。在参考实验剂量的基础上设定含有三到四个不同的浓度梯度，重复多次实验并对其进行验证。每24h进行观察，收集观察记录的数据，用GraphPad Prism5软件分析药物对斑马鱼胚胎发育的影响差异。

关键词：抗血管新生 阿帕替尼 斑马鱼 毒性评价

Developmental toxicity evaluation of the antiangiogenic drug apatinib on zebrafish embryos

Abstract

This article mainly studies the effect of apatinib on zebrafish embryo development, which belongs to the research category of developmental toxicology. The advantages of zebrafish and zebrafish in developmental toxicology were first introduced, and then the antiangiogenic drug apatinib was introduced. We mainly understand the nature, metabolic pathway and use of apatinib, and then introduce the aspects involved in the influence of apatinib on embryo development (mortality, deformity rate, hatching rate, body length, heartbeat, blood vessels, etc.), so as to determine the parameters to be observed after administration. The concentration gradient with three to four different concentrations was set on the basis of the reference experimental dose, and the experiment was repeated and verified for many times. Observation data were collected every 24 hours, and the effects of the drug on the embryonic development of zebrafish were analyzed with the software GraphPad Prism5.

Key Words: antiangiogenic; apatinib; zebrafish; toxicity assessment

目 录

摘要…………………………………………………………………………………I

ABSTRACT………………………………………………………………………II

第一章 文献综述 1

1.1 斑马鱼模型的简介 1

1.1.1 斑马鱼简介 1

1.1.2 斑马鱼的日常管理和繁育 1

1.1.3 斑马鱼胚胎发育 2

1.1.4 斑马鱼药物毒性与安全性评估 2

1.1.5 斑马鱼在筛选抗血管生成制剂方面应用 3

1.2 阿帕替尼简介及相关研究 4

1.2.1 阿帕替尼简介 4

1.2.2 阿帕替尼的毒理学及临床不良反应评价 4

1.3 研究目的和意义 5

第二章 实验材料与方法 6

2.1 前言 6

2.2 材料和方法 6

2.2.1 阿帕替尼样品 6

2.2.2 斑马鱼的养殖 6

2.2.3 实验耗材和试剂清单 7

2.2.4 实验仪器 7

2.2.5 实验方法 8

第三章 实验结果与讨论 11

3.1 GraphPad Prism5及数据处理简介 11

3.2 阿帕替尼对斑马鱼生存率影响结果 11

3.3 阿帕替尼对斑马鱼孵化率影响结果 12

3.4 阿帕替尼对斑马鱼致畸率影响结果 12

3.5 阿帕替尼对斑马鱼心跳影响结果 13

3.6 阿帕替尼对斑马鱼的ED₅₀影响结果 13

3.7 阿帕替尼对斑马鱼的心包水肿面积影响结果 14

3.8 实验结果分析 14

第四章 结论与展望 15

参考文献_{…………………………………………………………………………………………………………………}17

致谢_{……………………………………………………………………………………………………………………………}19

第一章 文献综述

1.1 斑马鱼模型的简介

1.1.1 斑马鱼简介

斑马鱼（zebrafish）属于体型较小的热带鲤科鱼类，性情温和，对水温的变化的适应性强，并且对水质要求不高，适合人工饲养。斑马鱼主要分布于东南亚及南亚的溪流，后被引入菲律宾、美国等地。斑马鱼呈现纺锤状，总长度约5cm，雌鱼体宽，腹部膨大，臀鳍呈现淡黄色，雄鱼体窄，身体呈现黄色，背部呈现橄榄色。斑马鱼从背部至尾部和臀鳍，布满多条蓝色条纹，类似于斑马，在水箱中游走时，因酷似驰骋于非洲草原的斑马群而得名。

斑马鱼与人类基因有百分之八十以上的相似度，大多数在斑马鱼身上的实验结果同样适用于人体^[1],所以斑马鱼通常作为一种模式生物。斑马鱼作为模式生物的优点有：个体小（唯一可进行微孔板高通量药物筛选的脊椎类动物）、发育周期短、试验周期短、费用低、体外受精、透明易观察、单次产卵数较高及实验用药量小 ^[2]。

1.1.2 斑马鱼的日常管理和繁育

斑马鱼生长和繁殖的温度一般在28.5℃左右，养殖斑马鱼时由于斑马鱼对环境温度要求较高，所以应该保持在一个稳定的温度范围内^[3]。在冬天，需要在暖房中对斑马鱼进行培育。与温度相比，水质对斑马鱼生活的影响不高，满足弱碱性水质即可，水质pH值控制在7-8，保持半个月清洗一次鱼缸。斑马鱼的耗氧量随着斑马鱼的生长发育而增长，因此还需要保证斑马鱼繁育时有足够的氧气供给 ^[4]。斑马鱼的生长条件较为温和，只要能够保证舒适的生长环境将会让斑马鱼的得病率大大降低。若由于水质条件出现问题而导致水质变差，斑马鱼可能会出现细菌感染，具体表现为鳃溃烂、尾部溃烂、鱼鳍溃烂等。若发生感染，感染的鱼需要及时捞出，避免其传染给其他健康的斑马鱼。与斑马鱼直接接触的用具应定期用75 %的乙醇消毒，每次消毒之后应该用水充分洗净。斑马鱼的成熟期在3-4个月，实验室培育使用的斑马鱼成熟期在5-6个月。饲养时，雌雄鱼分开饲养。在繁殖的前一天，将水族箱内的斑马鱼捞出放入同一产卵盒之中，

由于斑马鱼的产卵受光周期作用，故将鱼房的光照时间和黑暗时间控制在14:10，保证水温在28.5℃，并且增加投喂饵料的次数和数量。培育前一晚，将雌鱼和雄鱼分别产卵盒中，用挡板隔开。第二天天亮后抽掉挡板，待交配完成后，用滴管吸取受精鱼卵，清洗后放入培养箱进行培育。

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