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摘 要

目前，斑马鱼已经成为世界上最受重视的脊柱动物实验模型之一，因为斑马鱼基因与哺乳类动物基因的相似度高达百分之八十七，这一点表明我们在进行人体药理毒理实验时，可以先使用在斑马鱼模型中药理毒理实验中的数据，以此为基础进行人体药理毒理实验。斑马鱼模型的这一特点使其成为了研究抗癌药物的临床安全性评价方面的理想实验动物模型。本文主要研究卡博替尼对斑马鱼胚胎的安全性，卡博替尼是一种多靶点分子靶向药物，因其抑制了数种在肿瘤细胞生长过程中起重要作用的受体，所以具有显著的抗癌活性。本实验使用不同浓度的卡博替尼处理斑马鱼胚胎，统计斑马鱼胚胎的存活率、死亡率及致畸率来评价卡博替尼对斑马鱼胚胎的安全性。

关键词：斑马鱼 卡博替尼 模型 安全剂量

Selection of Safe Dosage for Small Molecule Compound Cometriq for Zebrafish Prevention

Abstract

Zebrafish has become one of the most respected spine animal experimental models, because of zebrafish genes with mammals similarity is as high as eighty-seven percent, this show that the pharmacology experimental data of zebrafish model can be used to human body, this characteristic of zebrafish model made it be the ideal experimental animal model in the clinical safety evaluation of anticancer drugs. this paper mainly studies the safety of Cometriq on zebrafish embryos. Cometriq is a multi-target molecular targeting drug, which has significant anticancer activity because it inhibits several receptors that play an important role in the growth of tumor cells. In this experiment, zebrafish embryos were treated with different concentrations of Cometriq, and the survival, mortality rate and teratogenicity rate of zebrafish embryos were calculated to evaluate the safety of Cometriq on zebrafish embryos.

Key Words: Cometriq; zebrafish; model;safe dose

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 斑马鱼模型的介绍及应用 1

1.1.1 斑马鱼简介 1

1.1.2 斑马鱼的养殖 1

1.1.3 斑马鱼的胚胎发育 2

1.1.4 斑马鱼在生物医学模型中的应用 4

1.1.5 斑马鱼药物毒性及安全性评估 5

1.2 小分子靶向药物卡博替尼简介及相关研究 7

1.2.1 卡博替尼简介 7

1.2.2 卡博替尼的应用 8

1.2.3 卡博替尼的不良反应 8

第二章 实验材料与方法 10

2.1 引言 10

2.2 实验材料 10

2.2.1 药物介绍 10

2.2.2 实验耗材和试剂清单 10

2.2.3 实验仪器 11

2.3 试验方法 11

2.3.1 药物的配置及组别设置 11

2.3.2 给药方式 12

2.3.3 斑马鱼胚胎的孵育及处理 12

2.3.4 确定卡博替尼最大安全剂量 12

第三章 实验结果与讨论 14

3.1 卡博替尼对斑马鱼存活率影响结果 14

3.2 卡博替尼对斑马鱼致畸性影响结果 14

3.3 卡博替尼的最大安全剂量 15

第四章 实验总结与展望 18

4.1 实验总结 18

4.2 实验展望 18

参考文献 20

致谢 22

第一章 文献综述

1.1 斑马鱼模型的介绍及应用

1.1.1 斑马鱼简介

斑马鱼（zebrafish），原产于印度、孟加拉国，别称为花条鱼、蓝条鱼、印度斑马鱼。斑马鱼体型很小，正常情况下为四至六厘米，体呈纺锤形，背部橄榄色，其体侧具有多条银蓝色纵纹（纵纹从鳃盖后直伸到尾末），在臀鳍部也有纵纹（与体色相近），尾鳍长而呈叉形。雄鱼柠檬色纵纹；雌鱼则为蓝色纵纹加银灰色纵纹^[1]。因为斑马鱼基因与人类基因有百分之八十七的同源性^[2]，我们根据这一特点，在进行药理毒理学研究时可以先构建斑马鱼模型，在此模型上进行实验，得到的实验数据还可用于人体，因而受到生物学家的特别重视^[3]。而且斑马鱼的胚胎透明，使得我们可以用非常便捷的方式来观察使用药物对斑马鱼胚胎器官所带来的的变化。

1.1.2 斑马鱼的养殖

斑马鱼在养殖方面较为容易，人工配合饵料或者各种鲜活饵料喂食也可，一般情况下为了使斑马鱼生长发育以及繁殖情况良好，我们可使用多种饵料结合喂食。若斑马鱼正处于繁殖期，也可在其饵食中适当加入一些元素，如维生素A、D、E以及微量元素铁、锌等来保证斑马鱼的性腺可以正常发育^[4]。

一般情况下，斑马鱼的生长温度为28摄氏度，极限条件下所能够承受的环境温度为6.7至41.7摄氏度^[5]。斑马鱼在低温环境下承受能力较高，在高温环境的承受能力则较差。我们在实验室培养斑马鱼时，应根据其的最适宜生长及繁殖温度（二十八点五摄氏度），若环境温度降低，直至11摄氏度时斑马鱼会因低温而出现死亡。因此当斑马鱼处于自然环境时是无法在北方度过冬天。我们应该依照淡水鱼的养殖条件来饲养斑马鱼，斑马鱼的养殖用水也有一定的要求，其酸碱度需要维持在7到8左右。在饲养过程中我们应根据当地水质的实际情况来决定养殖用水。如若当地水质符合斑马鱼的养殖条件，可以选择使用曝气水养殖；如果当地水质不符合斑马鱼的饲养要求，我们则需要使用蒸馏水，且在其中加入适量的矿物质盐以保证斑马鱼的正常生长。

一般情况下，在斑马鱼的养殖过程中，我们只要保证饲养条件适宜（温度、酸碱度、光照环境及各类矿物质等合适），斑马鱼基本不会因环境问题而得病。但是饲养所用水质温度、酸碱度、矿物质含量不适宜，可能会时微生物滋生，斑马鱼受到感染而导致生病，主要表现为烂尾、烂鳃、烂鳍、脱鳞、竖鳞以及皮肤充血发炎等症状^[4]。当发生上述情况时，要及时挑出病鱼，使用高锰酸钾溶液对其进行药浴处理。特别需要注意的是当我们进行药理实验或是毒理实验使用斑马鱼模型时，要及时观察斑马鱼的健康情况，若出现病鱼应该及时挑出淘汰，因为在进行药理实验时，我们在建立好的斑马鱼模型上使用药物治疗疾病时，病鱼所带有的特殊生理、病理状态会对药物疗效产生一定影响，进而影响实验结果。

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