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摘 要

斑马鱼（Zebrafish）由于其基因与哺乳类动物的基因有84%的同源性这一特点使其成为研究抗癌药临床安全性的理想生物模型。本论文建立了一种新的斑马鱼异种移植模型移植模型──通过将胃癌细胞移植到斑马鱼胚胎中来探究乐伐替尼的抗肿瘤作用。

乐伐替尼(Lenvatinib)的抗肿瘤作用是通过抗肿瘤血管新生而达到预期抗肿瘤的目的，其中血管的生成是许多生理和病理过程中的关键一环。一般情况下用抑制血管活性的化合物作为治疗异常血管生成疾病的治疗药物。

本实验选择了斑马鱼为异种移植模型，将胃癌细胞移植到斑马鱼胚胎当中，通过一系列实验研究乐伐替尼抑制血管新生的作用，其中包括观察乐伐替尼在不同浓度给药下肿瘤细胞对斑马鱼的致死率、致畸率来综合评价乐伐替尼抗血管新生的活性。

关键词：乐伐替尼 斑马鱼 抗血管新生

ABSTRACT

Effective animal models provide an effective platform for investigating new drugs, and zebrafish has become a comprehensive model animal for studying cancer. In the current study, we used a new xenograft model in zebrafish to determine the pharmacological effects of Lenvatinib by transplanting gastric cancer cells in zebrafish embryos.

The anti-tumor effect of levabinib achieves anti-tumor effects through anti-tumor angiogenesis, which is a key link in many physiological and pathological processes. Compounds that inhibit vasoactive activity are generally used as therapeutic agents for the treatment of abnormal angiogenic diseases. Zebrafish is an ideal biological model for studying the clinical safety of anticancer drugs because of its 84% ​​homology with the genes of mammals.

In this experiment, zebrafish was selected as a xenograft model, and gastric cancer cells were transplanted into zebrafish embryos. The effects of Lenvatinib on angiogenesis were studied through a series of experiments, including observation of Lenvatinib at different concentrations. The lethal rate and teratogenic rate of zebrafish were evaluated by tumor cells to evaluate the anti-angiogenic activity of Lenvatinib.

Keywords: Lenvatinib Zebrafish Antiangiogenic

目录

摘要 Ⅰ

ABSTRACT Ⅱ

第一章 文献综述 1

1.1斑马鱼模型的介绍及相关应用 1

1.1.1 斑马鱼简介 1

1.1.2斑马鱼模型在生物医学研究中的应用 3

1.1.3斑马鱼在筛选抗血管抑制剂方面的的应用 4

1.2 抗血管新生的研究 5

1.2.1血管新生的概念 5

1.2.2 肿瘤血管生成 5

1.2.3 抗血管新生的研究进展 5

1.2.4 筛选抗血管新生的模型 6

1.3 乐伐替尼的简介 7

第二章 实验材料与方法 9

2.1 引言 9

2.2 实验材料 9

2.2.1实验动物 9

2.2.2受试物 9

2.2.3 主要试剂和仪器 10

2.3 实验设计 11

2.3.1分组实验 11

2.4 实验方法 12

2.4.1胃癌细胞的培养 12

2.4.2斑马鱼胚胎的孵育处理 12

2.4.3确定斑马鱼胚胎移植最适温度 12

2.4.4建立斑马鱼异种移植模型 12

2.4.5确定乐伐替尼的最大安全剂量 13

2.4.6乐伐替尼对斑马鱼模型抗血管新生作用的探索 13

2.4.7乐伐替尼对肿瘤细胞增殖抑制作用的量效关系探究 13

第三章 实验结果与讨论 14

3.1 斑马鱼异种移植模型最适移植温度 14

3.2乐伐替尼对斑马鱼的抗血管新生活性 14

3.3 乐伐替尼对斑马鱼移植移植模型最大安全剂量 17

3.4乐伐替尼抑制肿瘤细胞增殖作用的量效关系 17

第四章实验总结与展望 19

4.1 实验总结 19

4.2展望 20

参考文献： 21

致谢 23

第一章 文献综述

1.1斑马鱼模型的介绍及相关应用

斑马鱼简介

1.1.1.1 斑马鱼作为模式生物的特殊地位

斑马鱼作为一种模式生物其在肿瘤研究方面发挥着很重要的作用，成熟的斑马鱼体长大约4-6cm，头部小且尖，身体整体呈纺锤状，斑马鱼拥有黄褐色的皮肤，斑马鱼的背部颜色是橄榄色，从鳃盖后到尾末的身体两侧有数条银蓝色条纹。雌性与雄性的颜色略有不同，雌性偏银灰而雄性则偏黄色。其皮肤表面均覆盖有蓝靛色条纹，因为身体两侧的纹酷似斑马纹所以由此得名斑马鱼。斑马鱼每次可以排出大量鱼卵且产卵后成长速度很快，长成完整个体仅需要一天时间。所以在同一代鱼身上进行不同实验得以实现，所以斑马鱼模型对于疾病机制的探究非常有益 ^[1]。

自上个世纪以来斑马鱼就开始被用于抗肿瘤药物分子模型。主要的自身优势有:①方便养殖、受精在体外且每次产卵量大，费用低。②斑马鱼受精后72hpf全身透明,因此可直观监测多个器官对药物的毒性及致畸性反应。③斑马鱼模型在实验过程中所需观察周期短并且使用的药物量少、给药方便。大多数药物都可以经皮吸收，可将药物直接加入内置斑马鱼胚胎的24孔板中。④斑马鱼胚胎容易进行直接修饰，因此可以使胚胎非常容易得到大量的突变子。有专家预测:斑马鱼可以被用作来进行疾病分析或细胞分析中间模型，该模型由于具备以上优点逐渐发展成为遗传学、分子生物学、病理学等学科的热点模型。斑马鱼还因为其基因与人类基因有高达84%的同源性而受到生物学家的重视，繁殖速度快,可用于进行大规模筛选相关药物 ^[2]，因为其在很大程度上表明对其所做实验得出的数据对人体同样适用。

图1-1斑马鱼结构图

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