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摘 要

发酵过程污染杂菌，会严重影响生产，是发酵工业的致命伤。杂菌的分布相当广泛,生产过程中稍有不慎就会造成污染，因此如何解决染菌问题就成了发酵工业的工作重点之一。

本文主要讲述我所在企业解决一次发酵生产线的染菌问题的过程，先通过对染菌情况的分析初步判断染菌是由公共系统导致的，且经过镜检观察菌体形态，确定所染杂菌的种类为芽孢杆菌，然后配制LB培养基，接着通过实验对空气系统和物料系统是否带菌及染菌是否由操作导致进行验证，结果发现染菌与空气系统和物料本身无关，染菌的原因是清洗有问题，输送管道没有洗干净且没有干燥导致滋生芽孢杆菌。最后对染菌原因进行验证，使这一结果得到证实。

关键词：发酵 染菌 分析验证 解决

Solving the problem of bacterial contamination in a company's fermentation production line

Abstract

Contamination of the bacteria during the fermentation process can seriously affect production, which is a fatal injury to the fermentation industry. The distribution of germs is quite extensive. In the production process, carelessness can cause pollution. Therefore, how to solve the problem of contamination has become one of the focuses of the fermentation industry.

This article mainly describes the process in which my company solves the problem of bacterial contamination in a fermentation production line. It first judges that the bacteria is caused by the public system through the analysis of the bacteria, and after microscopic observation of the morphology of the bacteria to determine the bacteria The species is Bacillus, and then LB culture medium is prepared. Then the air system and the material system are tested for whether or not the bacteria were contaminated and whether the bacteria were contaminated by the operation. The result was found to be independent of the air system and the material itself, and the reason for contamination was that the pipeline was not cleaned and there was no drying that caused the growth of Bacillus. Finally, the cause of contamination was verified and this result was confirmed.

Key words: fermentation; contaimination; analysis and verification; solution

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 概 述 1

1.1 研究背景 1

1.2 染菌的检测方法 1

1.3分析发酵染菌的原因 2

1.4 预防染菌的措施 2

1.4.1 防止空气系统带菌 2

1.4.2 防止种子染菌 3

1.4.3 防止培养基和设备灭菌不彻底 3

1.4.4 设备死角及渗漏的预防 3

1.5 染菌挽救与处理 4

1.6本论文的研究内容 4

第二章 实验部分 5

2.1 主要实验仪器与化学试剂 5

2.2 污染杂菌的检测 6

2.3 LB培养基的制备 6

2.4 验证空气系统是否带菌 6

2.5验证物料系统是否带菌 6

2.6验证染菌是否由操作导致 7

第三章 实验结果及验证 8

3.1实验结果 8

3.2 验证 10

第四章 结 语 11

五、参考文献 12

六、附录 14

6.1普通光学显微镜的使用方法、注意事项及维护保养 14

6.2净化工作台的使用、注意事项及维护保养 17

七、致谢 19

第一章 概 述

1.1 研究背景

发酵工业利用特定微生物在一定环境中代谢，从而得到产品。随着科学技术的进步，发酵技术已经有了长足的发展。现代发酵工业采用纯种子培养，大大提高了产量，但也增加了预防的难度^[1]。虽然在生产中采取了一系列措施，(如培养基以及发酵设备的灭菌、无菌空气的制备和培养过程的无菌操作等)，但仍然无法完全避免染菌的发生^[2]。染菌对工业发酵的影响很大，如何解决染菌问题是发酵工业的工作重点之一。

1.2 染菌的检测方法

1. 显微镜检查法

从发酵罐无菌取样后制成涂片，将涂片染色后使用显微镜观察菌体的形态特征^[3-4]。若在一个视野中观察到两个或两个以上的游动杆菌，则应判断为染菌。显微镜检查简单，能及时检测混合菌。然而，由于较少的取样和视野的观察范围小，用于检测早期发酵污染的细菌是不合适的^[5]。

2. 平板划线培养检查法

将经过灭菌检查合格的LB固体培养基加热融化后倒入灭菌培养皿，冷却后置于37恒温培养箱中培养24h，如确定无菌生长、方可使用^[6]。将待测样品在多个无菌平板上划线后置于37恒温培养箱中无菌培养24h，取出观察菌落形态特征。若多个平板中均出现同一种或几种不同于生产菌株的菌落特征的现象可判定为染菌^[7-8]。该方法能比显微镜检查出更少的杂菌，缺点是所用时间较长且操作繁琐。

3. 肉汤培养检查法

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