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摘 要

胃癌是最常见的癌种之一，在中国是癌症的第二大致死原因。斑马鱼和人类具有87%的基因同源性，根据斑马鱼特性，将人类癌细胞异种移植到斑马鱼体内，可用于进一步评估癌症进展和筛选药物。而在肿瘤生长过程中，诱导血管新生是很重要的过程，对于血管新生病理性的抑制在抗肿瘤进展中具有重大意义。阿帕替尼是VEGF受体-2的抑制剂，具有较强的靶向杀伤肿瘤细胞的能力。本论文以异种移植的斑马鱼血管新生为模型，探究人胃癌细胞SGC-7901最佳异种移植条件，评价药物阿帕替尼的最大耐受量和抗肿瘤细胞血管生成活性作用。

关键词：斑马鱼 胃癌细胞 阿帕替尼 抗血管新生

Evaluation of anti-angiogenic activity of chemotherapeutic drugs based on zebrafish xenograft model

Abstract

Gastric cancer is one of the most common cancers and it is the second death cause of cancer in China.Zebrafish has 87% genetic Similarity to human. According to zebrafish characteristics, xenotransplantation of human cancer cells into zebrafish can be used to further evaluate cancer progression and screen drugs.Inducing the angiogenesis is important to the growth of cancer.Inhibition of pathological angiogenesis is very significant in anti-cancer progression.Apatinib is an inhibitors of VEGF receptor with powerful ability to kill the cancer cells targetedly.This dissertation regards xenograft zebrafish angiogenesis as a model to find the best condition of Gastric cancer cells’ xenograft and assess the MTD and the anti-angiogenesis activity in cancer cells of the Apatinib.

Key words：zebrafish；gastric cancer cell；Apatinib;anti-angiogenesis activity

目 录

第一章 文献综述 1

1.1斑马鱼模型在生命科学研究中的应用 1

1.1.1斑马鱼简介 1

1.1.2药物研究中的应用 1

1.1.3斑马鱼在环境监测中的应用 2

1.2抗肿瘤药物及其研究进展 2

1.2.1抗肿瘤药物 2

1.2.2抗肿瘤药物的发展和展望 4

1.3.血管新生和抗血管新生 4

1.3.1血管新生 4

1.3.2抗血管新生 4

第二章 实验材料和方法 5

2.1引言 5

2.2实验材料和设计 5

2.2.1药物简介 5

2.2.2实验材料 5

2.2.3主要试剂和仪器 5

2.2.4实验设计 6

2.2.4实验流程 6

2.3实验方法 7

2.3.1胃癌细胞系的培养和标记 7

2.3.2斑马鱼胚胎处理 7

2.3.3斑马鱼胃癌细胞异种移植最适移植温度的摸索实验 7

2.3.4胃癌细胞SGC-7901的斑马鱼肿瘤异种移植模型的建立 7

2.3.5阿帕替尼对斑马鱼异种移植模型最大安全剂量摸索 8

2.3.6阿帕替尼对斑马鱼异种移植模型血管新生抑制作用的摸索实验 8

2.3.7阿帕替尼对于肿瘤细胞增殖抑制作用的量效关系摸索实验 8

2.3.8阿帕替尼对肿瘤细胞增殖的抑制作用的时效关系摸索实验 8

第三章 实验结果和讨论 9

3.1实验结果与统计分析 9

3.1.1斑马鱼胃癌细胞异种移植最适移植温度 9

3.1.2阿帕替尼对斑马鱼异种移植模型最大安全剂量 9

3.1.3阿帕替尼对血管新生抑制作用及其量效关系 10

3.1.4阿帕替尼对血管新生抑制作用的时效关系 11

3.2实验结论与讨论 12

参考文献 13

致谢语 15

第一章 文献综述

1.1斑马鱼模型在生命科学研究中的应用

1.1.1斑马鱼简介

斑马鱼是重要的模式脊椎生物。其头小而稍尖，体微长且呈现纺锤状，全身布有深蓝与金银色相间的条纹，酷似斑马条纹，而且在水中成群游动的鱼群又如奔腾的斑马群，因此称之斑马鱼。斑马鱼和人类基因高达87%的高度同源性，而且其体型较小易于养殖，体外受精，产卵量大，胚胎在早期发育迅速、透明，易于观察研究^[1]。

1.1.1.1斑马鱼的繁殖

通过斑马鱼身上条纹的颜色可以辨别斑马鱼的性别。一般来说，雄鱼条纹呈金黄色与淡黄色相间，雌鱼身上的条纹则是偏蓝色并与银色相间。雄鱼体型较为纤长，且腹部平坦，雌鱼恰恰相反。另外，雄鱼各鳍较长。

斑马鱼异体体外受精，繁殖周期一周左右，主要以温度控制产量^[2]。在受精结束后，及时将受精卵捞出，并剔除其中的异常卵和异物，一般畸形或有白色小斑点的都为异常卵。将受精卵放置于培养箱中，控制温度在25~29℃，且温差不超过0.5℃，大概两天后即可孵化^[3]。

1.1.1.2斑马鱼早期胚胎的观察

斑马鱼早期胚胎发育分四个时期：单细胞期、卵裂期、囊胚期和原肠胚期^[4]。斑马鱼受精卵是受精卵为非粘性沉性卵，1h左右开始分裂，此后每15min分裂一次，此为卵裂期。2.5小时后进入囊胚期，8小时进入原肠胚期。15小时后斑马鱼器官原基开始分化，并逐渐发育成鱼。3天正常发育的斑马鱼破胎而出，一周后开始自主捕食。

1.1.2药物研究中的应用

1.1.2.1药物毒性研究和免疫药理研究

以斑马鱼为模型进行运用于发育遗传学以及药物急性毒性的研究应用较多^[5]。运用斑马鱼研究吗菲林基因敲除技术、异位基因表达技术等就是斑马鱼在发育遗传学上的应用^[6];将不同浓度的若干同种药物加入到斑马鱼受精卵培养液中，通过观察每组鱼卵的死亡情况研究药物急性毒性^[7]，斑马鱼在药物毒性研究中作用巨大。

斑马鱼在免疫药理研究中也具有重大的意义，构建传染性疾病免疫模型用以研究感染疾病^[8]。近年来应用较多的模型有创伤性炎症模型、细菌感染模型、病毒感染模型^[9]。

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