论文总字数：16813字

摘 要

植物组织培养技术是以植物生理学为基础的繁殖植物的技术，解决了一些珍贵的植物药材生长周期过长，药用活性物质含量少，外界环境影响大的问题。

本实验对三种红豆杉进行了愈伤培养，来确定培养愈伤组织的最佳品种，利用不同的激素组合配比方案来确定最佳的诱导和增殖培养基。建立曼地亚、南方、东北这三种红豆杉愈伤组织培养体系的方法:将红豆杉的外植体放在体积分数为75%的酒精中浸泡30 s，然后用无菌水清洗 3次；再将外植体放入质量分数为0.1%的升汞溶液中浸泡8 min，最后再使用清水清洗5次。用手术刀在牛皮纸上将外植体的叶子切除，将嫩茎切成1 cm左右的小段，并划伤；放置于6种不同激素配比的培养基中，在黑暗条件下培养一个星期左右，暴露在光照条件下继续培养（恒温在25摄氏度），30 d之后，统计愈伤的数量，对愈伤的诱导率进行计算。得出愈伤诱导效果最好的品种为曼地亚红豆杉，嫩茎的愈伤诱导率为41%。植物生长激素配比试验表明，单独添加0.3 mg/LNAA，曼地亚红豆杉嫩茎诱导率达到83.33%，南方红豆杉嫩茎的诱导率达到43.75%,东北红豆杉嫩茎的诱导率达到26.67%

在褐化抑制试验中，抗坏血酸（VC）浓度达到0.1 g/L时，抑制褐化的效果最好，达到0.2 g/L时，褐化抑制的能力减弱。活性炭浓度在0.5 g/L时，褐化抑制剂效果达到峰值，继续添加活性炭时，褐化抑制能力反而会下降。活性炭浓度过高吸收了培养基中有利于愈伤生长的物质，导致褐化更加严重。茉莉酸甲酯则是在0.01 mmol/L时，褐化抑制效果最好。正交试验结果显示，抗坏血酸、活性炭以及茉莉酸甲酯的浓度分别为0.1 g/L、0.5 g/L和0.01 mmol/L时，愈伤组织的褐化抑制效果最佳。

关键词：红豆杉；愈伤组织；褐化抑制

Callus Induction and Browning Control of

different species of Taxus

Abstract

Plant tissue culture technology is based on plant physiology of a plant used to reproduce the technology to solve some of the precious plant problems like long growth period, low medicinal value content and the external environmental impact.

In this study, the effects of yew varieties, plant hormones and other factors on the induction and development of callus of Taxus were studied, and the callus culture system of Taxus was optimized. To establish the methods of callus culture system of three species of Taxus chinensis, The explants of yew were soaked in alcohol at a volume fraction of 75% for 30 seconds and then washed three times with sterile water; And then the explants into the mass fraction of 0.1% of the mercury solution soak for 8 minutes, and finally use the water to wash 5 times. Use the scalpel to cut the leaves of the explants in kraft paper, cut the stems into small pieces of about 1cm, and scratched. The explants were placed in 6 different hormone mix media, incubated for about a week under dark conditions. The explants were then exposed to light conditions for continued culture (constant temperature at 25 degrees celsius). After 30 days, count the number of calls. Calculate the callus induction rate. The best varieties of callus induction were derived from Taxus yunnanensis, the callus induction rate of tender stems was 41%. When adding 0.3mg / L NAA alone,the induction rate of stems of Taxus japonicus was 83.33%, and the induction rate of the stems of Taxus chinensis was 43.75%. The induction rate of the stems of Taxus cuspidata was 26.67%.

In the browning inhibition test, ascorbic acid (VC) concentration of 0.1g/L, the inhibition effect of browning was the best, when the content was to 0.2g/L, the ability of suppress browning is reduced. At 0.5g/L, browning inhibition by activated carbon is the best. However, as the concentration heightening, there were more serious browning. Methyl jasmonate is 0.01mmol/L, the browning inhibition effect to achieve the best.

Key words: Taxus; callus; browning inhibition

目 录

摘 要 I

Abstract II

目 录 IV

第一章 文献综述 1

1.1红豆杉的概述 1

1.1.1红豆杉 1

1.1.2曼地亚红豆杉 1

1.1.3南方红豆杉 1

1.1.4东北红豆杉 2

1.1.5紫杉醇 2

1.1.6愈伤组织的培养 3

1.1.7愈伤组织继代 3

1.1.8愈伤组织培养方法的研究进展 4

1.2愈伤组织褐化抑制研究 4

1.2.1愈伤组织褐化的机理 4

1.2.2愈伤组织褐化的抑制方法 4

1.3研究背景 5

1.3.1本课题研究内容 6

1.3.2本课题的研究目的和意义 6

第二章 材料与方法 7

2.1 材料与试剂 7

2.1.1 试验材料 7

2.1.2 试验试剂 7

2.1.3 试验器材 7

2.1.4培养基的配方 7

2.2 试验方法 8

2.2.1 愈伤诱导 8

2.2.2愈伤褐化的抑制 9

第三章 结果与讨论 10

3.1红豆杉愈伤的诱导 10

3.1.1红豆杉的品种以及激素配比对愈伤组织初愈的影响 10

3.1.2不同红豆杉品种的愈伤诱导率 11

3.1.3不同激素配比对愈伤诱导率的影响 12

3.2愈伤组织的褐化抑制 13

第四章 总结与展望 17

4.1 结论 17

4.2 展望 17

参考文献 18

致谢 20

第一章 文献综述

1.1红豆杉的概述

1.1.1红豆杉

红豆杉既有灌木也有乔木，侧根发达。树叶呈现为螺旋状互生的状态，呈现条形，在嫩茎两侧展开，的种子呈现红色圆球状，底被假种皮环绕。由于红豆杉异花授粉，雌雄异株的特性，并且生长速度慢，繁殖能力低下，使得天然资源十分有限。红豆杉除了其观赏价值外，要用价值也是非常的巨大，自古红豆杉的药用作用在古代医学史上就有记载，能够用来清热解毒^[1]。红豆杉全身是宝，树叶，嫩茎都可以用来入药^[2]。

1.1.2曼地亚红豆杉

曼地亚红豆杉原产于加拿大的杂交品种，属于灌木，根侧系较为发达。分布在我国东北、华中、西南等地区，其中陕西、江苏、四川、浙江等地区生长的比较多，该物种枝叶茂盛，树叶一年四季的呈现绿色，生长速度很快，种子萌发力很强，能够很快的适应环境^[3]。并且植株的叶、茎、树皮均含有可利用的紫杉醇，其含量可达 0.04%左右，其中生长四五年左右的红豆杉所含有的紫杉醇含量比较高^[4]。

1.1.3南方红豆杉

南方红豆杉又叫做赤柏松、紫衫等，属于常绿乔木，喜欢生长在阴冷潮湿的地段，生长缓慢，树皮的颜色常常呈现为深褐色，但是一年生的年轻的呈现出绿色，果实为卵圆状颜色呈红色。通常生长在海拔比较低的山谷内。在我国主要分布于南河南、陕西、云南等地区，不仅具有观赏价值，而且含有多种紫杉烷类二萜化合物，其中具有抗肿瘤的活性物质有十多种，活性最强的属紫杉醇^[5] 。

1.1.4东北红豆杉

东北红豆杉也是红豆杉科红豆杉属植物,又名紫衫，在中国东北红豆杉含有的紫杉醇含量还是较高的，尤其野生的红豆杉紫杉醇含量要高于人工栽培的红豆杉^[6]。属于乔木，生长缓慢，树皮呈红褐色,一年生的呈现为绿色，但是到了秋冬季节也会变成淡红褐色。种子为红色卵圆状，一般在九月或者十月份成熟。主要生长在阴冷潮湿的地方，在我国、日本、朝鲜均有生长，在我国长白山地区生长比较多 ^[7]。通常在海拔高度600~1200m之间生长，多生于鱼鳞云杉、白桦、红松、山杨等针阔混交林之间，在治疗子宫癌有作用。其茎、叶、根、支都可以作为药物。

1.1.5紫杉醇

早在1856年, 德国的科学家 Lucas.H从欧洲红豆杉的叶子中提取了紫杉碱 (Taxine)^[8]，由于当时的技术跟不上，所以有关于紫杉醇的研究也没有什么突破性的进展，直到后来检测技术发展起来，紫杉醇才更好的发挥价值。紫杉醇作为抗癌药物，具有广谱、毒副作用小、高效等优点,在许多国家已经被临床应用,能够作用于很多恶性肿瘤 ^[9]紫杉醇属于二萜类结构，分子式为C₄₇H₅₁O₁₄N，不溶于水，分子量为853.9，具有高度的亲脂性，熔点在216~217之间,在pH4~8范围内比较稳定，当pHgt;8的时候，紫杉醇很容易分解^[10]。

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