论文总字数：13816字

摘 要

本文首先对噬菌体展示技术的定义、优缺点、重要性，以及未来前景进行了介绍；并大概论述了噬菌体的分类。通过阅读大量文献，总结归纳，优化出适合的噬菌体文库复苏方法，并对其进行检测。我们将以文库组提供的甘油菌为基础，通过复苏，沉淀，菌检，以及测序结果分析，测定滴度，验证是否合格。设计实验后，我们将以抗HSA噬菌体文库为例，将其复苏沉淀出来后，验证结果是否符合我们的要求。然后将其形成固定操作流程，写成SOP文件，上报公司，形成受控文件。

关键词：复苏 沉淀 菌检 测序结果

Phage shows the preparation of antihsa antibody libraries

Abstract

This paper introduces the definition, advantages and disadvantages, importance and future prospect of phage display technology .The classification of phage was introduced.By reading a large amount of literature, the author summarizes and summarizes the method of recovery of the suitable bacteriophage, and tests it.We will provide the basis of the glycerin bacteria provided by the library group, through the recovery, precipitation, titer test, and the analysis of the results of the sequencing, to determine whether the drops are qualified.After the design experiment, we will take the case of the anti-HSA bacteriophage, and the recovery of the recovery will be settled, and then verify that the results are in line with our requirements.It then forms a fixed operation process, writes the SOP file, reports the company, and forms a controlled file.

Key Words: Rescue；Precipitate；QC；Sequencing Analysis

目 录

摘要 1

ABSTRACT 2

第一章 前言 4

第二章 实验设计 6

第三章 实验 9

3.1 复苏 9

3.2 沉淀 10

3.3 稀释 11

3.4 菌检 13

3.5 Polyclone Phage ELISA 15

3.6 测序结果分析 18

第四章 实验总结及讨论 19

参考文献 20

致谢 22

1. 前言

近年来，随着医学和生物科技的不断发展，针对各种病症的药物也越来越多。即使外科手术不断发展，但对于晚期肿瘤仍没有较好的方式，同时也没用较好的针对药物。因此，化学疗法给治疗肿瘤提供了新的希望，并得到较快发展，大量靶向药物开始应用于临床。，但在其取得较好的疗效,同时，也产生了较大的不良反应。所以，探索新的并且安全的肿瘤治疗方式尤其重要。

抗体技术的引入将肿瘤治疗带上一条新的大道，分子靶向治疗成为治疗肿瘤的另一种手段。抗体技术重要的内容就是抗体药物，抗体药物的发现有多种途径，较为高效的方式为噬菌体展示技术。噬菌体表面展示技术（phage display）是一种对多肽功能非常有效的筛选技术，它将外源蛋白分子或多肽的基因克隆到丝状噬菌体基因组中，与噬菌体外膜蛋白融合表达，展示在噬菌体颗粒的表面。因为外源蛋白或多肽的基因型和表型统一在统一噬菌体颗粒内，是以，经由过程表型挑选就能够获得它的编码基因。基于生物份子与药物靶份子（抗体、受体、抗原、酶的底物等）的亲和力，利用噬菌体概况展现手艺可以从多肽库或抗体库中举行快速挑选，从而成为药物开辟的强有力东西。今朝噬菌体展现手艺的钻研进展很是敏捷，在抗原决定簇的定位、蛋白质相互作用位点简直定、特异调理份子的分手和人工抗体和疫苗的制备、诊断手艺、酶抑制剂的钻研开辟、多肽药物的研制等生物手艺钻研的分歧范畴获得了利用，并对这些范畴发生了深远的影响。该手艺的主要特点是将特定份子的基因型和表型统一在统一病毒颗粒内，即在噬菌体概况展现特定蛋白质，而在噬菌体焦点DNA中则含有该蛋白的构造基因。还有，这项手艺把基因表达产品与亲和挑选结合起来，可以操纵恰当的靶蛋白将目标蛋白或多肽挑选出来。到目前为止，人们已开辟出了单链丝状噬菌体展现体系、λ噬菌体展现体系、T4噬菌体展现体系等数种噬菌体展现体系。

噬菌体展现手艺的一个主要组成是噬菌体载体,有很多种噬菌体可以作为载体运用于噬菌体展现, 按表达外源蛋白的噬菌体种别的分歧, 可将噬菌体展现体系分为丝状噬菌体展现体系、λ噬菌体展现体系、T4噬菌体展现体系、T7噬菌体展现体系、噬菌粒展现体系等5类。

大多数情况下，我们目前使用的均为丝状噬菌体展示。丝状噬菌体属于单链环状DNA病毒, 大肠杆菌丝状噬菌体M13、fd、fl等包裹在宽7 nm、长900 ～2 000 nm的衣壳中, 环状单链DNA编码10个蛋白, 其中有5个衣壳蛋白, 即主要衣壳蛋白PⅧ和4种次要衣壳蛋白PⅢ、PⅥ、PⅦ和PⅨ。在丝状噬菌体展示系统中, 主要的展示蛋白是pⅧ和pⅢ蛋白。用于丝状噬菌体展示的载体主要有噬菌体载体和噬菌粒载体。噬菌体载体比较稳定, 但转化效率较低^{[ 3 ]} 。而且如果在p Ⅲ的N 端展示过大( gt; 100氨基酸) 的肽会影响到p Ⅲ与大肠杆菌性纤毛的相互作用, 而使得感染大肠杆菌的效率降低。噬菌粒载体系统能有效地解决pⅢ融合蛋白失去感染能力的问题, 并且更容易改造噬菌粒来获得新的特征。但是pⅢ低价展示使得从p Ⅲ展示系统中分离蛋白效率低, 可以通过改进辅助噬菌体^{[ 4 ]}或者改进被展示蛋白的分泌特性^{[ 5 ]}来解决这一问题。

作为噬菌体表面展示技术最基本，也是很重要的，是文库的复苏，噬菌体文库的制备，同时也需对其进行检测，验证噬菌体文库是否合格及质量。由此，本研究拟用查阅大量文献，分析其中的噬菌体文库制备方法，归纳总结，并对其优化，寻找一种合适的，能广泛应用的制备方法。然后用该方法，制备抗HSA噬菌体文库，然后检验生产的噬菌体文库是否合格，其质量是否符合我们的要求，并对文库进行以后筛选过程的粗略评估，为以后的工作打下基础。本实验是寻找一种共通的方法，对所有文库来说，不一定是最佳的。

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