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摘 要

银杏黄酮是从银杏树的根、茎、叶等部位当中提取的天然活性物质，对人体有着很好的治疗保健作用，能够增加脑血管流量，改善脑血管循环功能，防止血栓形成，提高机体免疫能力的功能，应用潜力巨大。对于目前银杏的提取物主要是从银杏树叶及其果实中获取, 其中又以银杏黄酮类和内酯类为主要。由于银杏属于我国保护植物且, 人类对于银杏类产品的日益需求量大,使得野生银杏资源日益匮乏，因此直接利用野生银杏受到了很大的制约。

内生真菌是指生活在植物体中，在植物的一段或整个生长史中，对植物体没有引起病害或能够促进植物体抵抗生物和非生物等的危害，起到促进和保护植物生长的微生物。研究表明有的植物内生真菌的次级代谢产物能够产生与植物相同或者类似的药效作用，筛选和培育产次生代谢产物的内生真菌成为了现在非常热门的研究。

本课题从银杏茎中分离得到银杏内生菌GBX-1，并开展如下研究：银杏药渣汁对真菌GBX-1的生长状况影响其中40g/L的药渣汁添加量能够明显的促进真菌的生长；通过分光光度法检测，利用PD培养液培养的GBX-1具有产黄酮能力，其中菌丝为128.750μg/g,发酵液0.632μg/mL；同时利用银杏药渣进行真菌的固态发酵的试验条件探索，黄酮类物质检测结果表明，经固体发酵后，共培养物中的银杏黄酮含量比银杏药渣中约高1.2倍，说明利用银杏药渣进行固态发酵培养具有良好的应用前景。

关键字：银杏，内生真菌，黄酮类物质，分光光度法，银杏药渣

Abstract

Ginkgo flavone extracted from ginkgo tree roots, stems, leaves and other parts of the natural active substance which, has a very good therapeutic health effects on the human body and can increase cerebral vascular flow, improve cerebral circulation, prevent thrombosis, improve immunity ability to function, application potential. For the present, ginkgo extract is mainly obtained from ginkgo leaves and fruit. And the main are flavonoids and lactones . Because Ginkgo belongs to the Chinese protected plants and people are in great demand for ginkgo products , wild ginkgo resources are increasingly scarce, so the direct use of wild ginkgo has been greatly restricted.

Endophytic fungi is a microorganism which lives in the plants’ body, do not cause disease or can promote the plant resistance to biological and non biological and other hazards, to promote and protect the plant growth.The study showed that the secondary metabolites of endophytic fungi have the same or similar medicinal effects which the plant have.Screening and breeding of the secondary metabolites of endophytic fungi has become a very popular research.

This topic from the stem of Ginkgo isolated endophytic fungi in Ginkgo GBX-1, and carried out the following research: growth condition of gingko medicine juice and dreg of fungal GBX-1, which 40g / L dregs juice add volume can significantly promote fungal growth; by spectrophotometrically detected, using PD culture GBX-1 liquid culture with the production capacity of flavonoids, the hyphae 128.750μg/g, fermentation broth 0.632μg/mL; also, exploration and utilization of Ginkgo residues for fungal solid state fermentation test, flavonoid detection results show that, after solid fermentation, co culture of Ginkgo flavonoids content than silver apricot dregs About 1.2 times that of the solid-state fermentation has a good application prospect and utilization of Ginkgo dregs.

Key words: Ginkgo , endophyticfungi,flavonoids,spectrophotometry, ginkgo residue

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 前言 1

1 植物内生菌的概况 1

1.1内生菌的分布及多样性 2

1.2内生菌的活性及代谢产物 2

2 银杏及其代谢产物的介绍 4

2.1 银杏简介 4

2.2 银杏的开发利用 5

2.3银杏内生真菌研究概述 7

3 本研究的内容 8

4目的与意义 8

第二章 银杏内生真菌培养条件的研究 9

1银杏内生真菌的分离 9

1.1 仪器和试剂 9

1.2分离培养基 9

1.3内生真菌分离纯化方法 10

2菌株培养条件的研究 11

2.1培养方案 11

2.1.2银杏药渣固体发酵培养 12

2.2结果与分析 12

第三章 银杏内生真菌产黄酮的研究 14

1 材料和方法 14

1.1 仪器、材料和试剂 14

1.2待测样品的制备 14

2显色反应样品的制备 15

3 标准曲线的制作及各培养物总黄酮检测 15

3.1最大吸收波长选取 15

3.2芦丁标准曲线的绘制及样品中黄酮含量的测定 15

4 结果与分析 15

4.1 PD加菌的显色反应结果 15

4.2芦丁标准曲线 16

4.3 银杏内生菌总黄酮的测定 16

5 讨论 17

参考文献 18

致谢 20

第一章 前言

1 植物内生菌的概况

植物内生真菌包括细菌、真菌菌、放线菌和卵菌^[1]。内生真菌指的是在植物生长史和生活史中，生长在植物组织细胞间的微生物，跟生活在植物表面的微生物有很大的差别^[2]。内生真菌的范畴同样也包含着植物体内的菌根菌和致病菌。而生活在地上部分，且在活的植物组织细胞间内，但是不对植物产生任何病害的内生真菌，这一概念体是1986年Carroll提出来的，体现了植物与内生菌的关系，也排除了植物体中的菌根菌和致病菌^[3]。 Petrini对 Carroll提出的概念进一步的拓展^[4]：指生活在植物的某一段生活史或生长史中，而且对植物体本生没有引起严重的病害症状的内生菌，同样包括那些在存货期间内寄生在植物表面上长的腐生菌，在短时间内对宿主没有产生病害或者有潜伏性的病害症状但是没有表现出来的内生菌。目前对于内生菌的概念还没有引起很大的争议，但在目前对内生菌研究当中，Petrini 对Carroll所修改的内生菌的概念被研究内生菌的学者们所接受^[3]。

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