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摘 要

熊果酸 ,是一种天然的弱酸性五环三萜类物质。在自然界分布非常广泛,是多种天然药物的功能组成部分。纯净的熊果酸是白色的像针状晶体(乙醇中结晶),味苦,其基本骨架是多氢蒎的五环母核,分子式为C₃₀H₄₈O₃ ,分子量为:456.68。熔点为283～288℃,不溶于水和石油醚,易溶于甲醇、吡啶、丙酮和吡啶。

本文采用HPLC对中药提取物中的熊果酸进行分析，选择C18柱，流速为0.8ml/min，柱温为25℃，波长为250nm，流动相为：甲醇-水-冰乙酸-三乙胺 (87:13:0.04:0.02)，得到最佳检测熊果酸的HPLC分析条件，中药浸膏中熊果酸的含量为0.34%。

关键词：熊果酸 HPLC 含量测定

Abstract

Ursolic acid, is a kind of weak acid of three pentacyclic triterpenoids. It is widely distributed in nature and is a functional ingredient of many kinds of natural products. Ursolic acid in pure is white needle crystal (ethanol crystallization) with bitter taste, the basic skeleton is multi hydrogen pinene rings with the parent nucleus, the molecular formula is C₃₀H₄₈O₃. Molecular weight is: 456.68. Melting 283 ~ 288℃, insoluble in water and petroleum ether, soluble in methanol, pyridine, acetone and pyridine。

In this paper, the HPLC analysis of traditional Chinese medicine extract ursolic acid, choose C18 column, the flow rate is 0.8ml/min, column temperature is 25℃ and 250 nm wavelength. The mobile phase: methanol; water; glacial acetic acid and triethylamine (87:13:0.04:0.02), obtained optimal detection of ursolic acid by HPLC analysis conditions, extract ursolic acid content is 0.34%

Keywords: Ursolic acid; HPLC; content determination

摘要 I

第一章 文献综述 1

1.1 熊果酸的概述 1

1.1.1 熊果酸的结构性质 1

1.2 熊果酸的药理作用 2

1.2.1 对中枢神经系统的作用 2

1.2.2 抗艾滋病作用 2

1.2.3 对精子的毒性作用 3

1.2.4 抗糖尿病作用 3

1.2.5 抗疟作用 3

1.2.6 抗肿瘤作用 3

1.3 熊果酸在临床中的应用 5

1.4 熊果酸在天然产物中的分布 5

1.5.1 分光光度法 6

1.5.2 薄层色谱法 6

1.5.3 薄层扫描法（TLC） 6

1.5.4 高效液相色谱（HPLC） 7

1.5.5 气相色谱法（GC） 7

1.5.6 胶束毛细管电泳法（MEKC） 7

第二章 实验仪器和材料 9

2.1 实验仪器 9

第三章 实验方法与结论 11

3.1 实验方法与条件 11

3.2 结果与讨论 12

3.2.1 标准曲线的建立 12

3.2.2 精密度 12

3.2.3 稳定性 13

3.2.4 重复性 14

3.2.5 回收率 15

3.2.6 样品含量测定 15

第四章 结论 17

4.1 结论 17

参考文献 18

致谢 21

第一章 文献综述

1.1 熊果酸的概述

熊果酸，是一种天然的三萜类五环灵芝酸，高纯度含量为细长柱状或针状结晶，熊果酸在自然界中的许多植物中都含有，而且它具有较强的细胞毒性，在抗癌、镇静安定、保肝护肝、消除炎症等方面具有良好的作用，因此，熊果酸研究的深度和广度逐渐地被学者们所扩大，其作用也越来越多样。

1.1.1 熊果酸的结构性质

熊果酸的分子式为C₃₀H₄₈0₃ ，结构上是有数个异戊二烯去掉羟基后首尾相连的五环三萜类物质，示意图如下：

图1.1 熊果酸的结构式

Fig.1.1 chemical structure of ursolic acid

⑴熊果酸的物理性质^[1]：

高纯度的熊果酸是具有细长柱状或针状结晶，熔点处于283~287℃之间，有特殊气味，味道略淡且带苦，具有旋光性，熊果酸含有多个羟基，水溶性较差，所以在许多有机溶剂中为易溶，如氯仿、乙腈等。

⑵熊果酸的化学性质^[2]：

a.Liebermann-Burchard reaction(醋酐-浓硫酸反应)：将样品磨成粉状，加入乙醚进行提取，完成后加热蒸干，再加入醋酐-浓硫酸，先显现黄色，渐变红色、紫色，最后变为绿色。

b.Kahlenberg reaction：(五氯化锑反应)：将熊果酸样品溶于乙醇中，在滤纸上进行点样，用装有五氯化锑的喷雾装置喷洒滤纸表面，在65℃左右进行加热干燥，斑点变为蓝色、灰色或紫色^[30]。

c.Tschugaeff reaction(冰醋酸-乙酰氯反应)：将样品和冰醋酸混合，摇匀后，滴入乙酰氯数滴，混合完全后加入几粒氯化锌的结晶，最后再加热即可显红色。

1.2 熊果酸的药理作用

熊果酸的药理性质复杂而多样，例如中枢镇静安定、抗纤维化、恢复肝功能、抵抗溃疡、降低血脂、预防癌症等。而且熊果酸及其衍生物还具有对体外革兰氏阴性和阳性菌的抗菌活性和细胞毒性，所以熊果酸逐渐地被研究人员们发现新的功能与作用，在其领域内的地位也逐渐升高，具体的作用如下所述：

1.2.1 对中枢神经系统的作用

谷氨酸(Glu)是脑与脊髓中最为常见的神经递质，分布在超过90%的兴奋性突触中。但其大量释放并堆积在突触间隙，会使受体过度兴奋激活，引起一系列神经细胞或其它组织细胞的死亡^[3] 。熊果酸能抑制Ca ²的内流和外流，以此来减少谷氨酸的释放，保护神经元细胞不受神经毒性的侵害^[4]，为谷氨酸过度释放而造成的多种神经变性病变的预防提供了相关的依据。

1.2.2 抗艾滋病作用

在艾滋病病毒当中，HIV-1蛋白酶的活性相对其它酶来说较强，而熊果酸对它有相当的抑制作用，半抑制浓度约为7.9μm^[5]，HIV-1蛋白酶是由两个相同的肽链构成的酶，熊果酸可能是通过抑制HIV-1蛋白酶的肽链合成作用来抑制HIV-1蛋白酶的活性^[6]。

1.2.3 对精子的毒性作用

共质体是细胞之间通过连丝将许多细胞连接在一起形成的一个相互密切联系的整体，而熊果酸能破坏胞间桥的肌动蛋白，打开其中的桥键，从而产生共质体，使精原细胞互相连接在一起，不能产生精子，所以熊果酸在未来可能会被研究生产为一种男性避孕药^[7]。

1.2.4 抗糖尿病作用

对于因为感染了链脉佐菌素的大鼠，一段时间后发现大鼠出现糖尿，通过熊果酸的治疗，能够对大鼠的尿糖、尿量等造成显著的抑制作用^[8]。

1.2.5 抗疟作用

疟原虫的繁殖速度很快，而熊果酸能够显著地减缓其增长速度^[9]。熊果酸对氯喹抵抗型(K1)和敏感型(T9-96)疟原虫的抗疟原虫半数致死量分别为36.5 μg/ml和28 μg/ml^[10]。

1.2.6 抗肿瘤作用

熊果酸在癌症的预防和抑制方面也有着不小的作用，特别是肿瘤生长的初期阶段，具体功能如下：

⑴ 抑制癌细胞形成

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