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固相合成生物活性多肽的液相分离与分析毕业论文

 2022-06-25 22:54:25  

论文总字数:12317字

摘 要

多肽是一类由氨基酸组成、比蛋白质小、结构简单、生理活性强的物质,与蛋白质没有本质的区别,但又不同于蛋白质。在随后的多肽研究中,把一部分功能明确、能调节生物生理功能的多肽称为生物活性多肽或功能肽。

本论文针对合成生物活性多肽,以RP-HPLC为分析模式,选择0.1%的TFA水溶液作为流动相A、0.1%的乙腈作为流动相B分析合成多肽的各步骤中间体及最终产物,考察了流动相pH值、柱温以及流动相梯度对这些多肽的影响,摸索出较稳定的HPLC分析方法。同时,采用定量分析检测合成生物活性多肽中乙酸的浓度,考察了线性、专属性和精密度,初步建立了分析方法学,并用该方法检测多肽样品中乙酸含量。

关键词:生物活性多肽 固相合成 HPLC 乙酸

HPLC Analysis of Bioactive Synthetic Peptides

Abstract

Peptide is sequenced with amino acid residues, which has simple structure and strong physiological effects. Peptide is smaller than protein. There are no essential difference between peptide and protein.

In the following research, synthetic peptides and the intermediates were studied with HPLC. Mobile phases were: 0.1% TFA water as mobile phase A and 0.1% TFA acetonitrile as mobile phase B. The effect of pH, temperature and mobile phase gradients were studied to provide a best separation result. Acetic concentration was also studied with the standard reagent of sodium acetate. Methodology study includes specificity, linear and precision. This method was applied to analyze acetic acid content in a bioactive peptide.

Key-words: bioactive peptides, solid phase peptide synthesis, HPLC, acetic acid

目 录

摘 要 1

ABSTRACT 2

第一章 文献综述 3

1.1 多肽药物的发展 3

1.2 HPLC的发展 5

1.3 HPLC在多肽的分析中的作用 6

1.4 实验目的和意义 7

第二章 实验方法 8

2.1 试剂与仪器 8

2.1.1 试剂 8

2.1.2 仪器 8

2.2 实验方法 8

2.2.1样品的处理 8

2.2.2流动相的配制 8

2.2.3色谱条件 8

2.3多肽分析条件的优化 8

2.3.1流动相pH值的优化 8

2.3.2流动相梯度的优化 9

2.3.3柱温对多肽分析的影响 10

2.4 乙酸测定方法及多肽中乙酸含量分析 10

2.4.1专属性 11

2.4.2方法的线性和定量限、检测限的测定 11

2.4.3分析系统的精密度 11

2.4.4检测多肽样品中的乙酸 11

第三章 结果与讨论 12

3.1 多肽分析条件优化方面的结果与结论: 12

3.1.1流动相pH的优化 12

3.1.2流动相梯度的优化 14

3.1.3柱温对多肽分析的影响 20

3.2 乙酸测定方法及多肽中乙酸含量分析的结果 21

3.2.1专属性 21

3.2.2方法的线性和定量限、检测限的测定 22

3.2.3分析系统的精密度: 23

3.2.4检测多肽样品中的乙酸 24

第四章 结论 25

参考文献 26

致谢 27

第一章 文献综述

1.1 多肽药物的发展

上世纪初科学家开始关注一类由氨基酸组成、比蛋白质小、结构简单、生理活性强的物质,这类物质与蛋白质没有本质的区别,但又不同于蛋白质,被称做“肽”或“多肽”。在其后的研究中,把其中一部分功能明确、调节生物生理功能的多肽称为生物活性多肽或功能肽[1]

多肽药物的范围很广,包括多肽激素、细胞生长因子、淋巴因子、凝血因子和酶等[2]。多肽药物是在二十世纪90年代后期才有了长足的发展,在国际医药市场中所占份额也不断提高。近些年来,新的技术不断涌现,多肽药物的适用范围也越来越广泛,而且功效显著。与其它药品相比,多肽药物具备高效、低毒和特异性强的显著优势。

据预测未来5年多肽类治疗药物每年将以高于17%的幅度扩张,与增长率仅为9%的总体医药市场相比,该领域令人注目[3]

例如糖尿病用药的发展:随着社会的发展以及物质生活的极大改善,糖尿病已成为危害人类健康的最大凶手之一,根据国际糖尿病联盟最新统计,全球糖尿病在20-79岁成人中的患病率为8.3%,患者人数已达3.82亿,这一数字比世界卫生组织(WHO)预测的提早了十几年,而到目前为止,我国已成为糖尿病患者最多的国家,据IDF数据显示,中国2013年糖尿病的患病人数为9840万,居全球首位。沿用1999年WHO的分型,糖尿病分为以下四种类型:1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病和其他特殊类型糖尿病,其中2型糖尿病患者占总人数的90%以上。艾塞那肽是首个获准上市的肠促胰岛素类似物药物,主要用于治疗2型糖尿病。艾塞那肽最初是从分布于美国西南部以及墨西哥北部的钝尾毒蜥唾液中分离得到的天然多肽激素,由39个氨基酸残基组成,与人的胰高血糖素有48%的序列同源性,与胰高血糖素样肽-1有53%的序列同源性。艾塞那肽对血糖的调控主要是通过抑制胰高糖素释放,延缓胃排空速率,抑制食物摄入,增加饱食感,促进胰岛β细胞增殖分化,抑制胰岛β细胞凋亡等方面实现的[4]

同样,在治疗心肌肥大方面多肽药物汇利心康GCIP-27[5]是针对在心肌肥厚发生发展过程中具有重要作用的G蛋白α亚单位设计合成的一种G蛋白竞争性抑制肽,前期的研究发现该多肽药物能明显阻止去甲肾上腺素和血管紧张素Ⅱ诱导的体外培养的大鼠心肌细胞肥大,明显改善由NE注射或手术缩窄腹主动脉所诱导的小鼠、大鼠以及自发性高血压大鼠的心肌肥大,其作用优于卡托普利、氯沙坦和硝苯地平。

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