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对应英文翻译：

验证HPTLC法那氟沙星同测定利用分式析因设计糠酸莫米松和硝酸咪康唑乳膏

概括

对于那氟沙星，高效薄层色谱法同时测定糠酸莫米松、硝酸咪康唑的开发和验证，可以为国际会议协调指导方针。高效薄层色谱分离是在铝板预涂硅胶60F254和甲醇：乙酸乙酯：甲苯：乙腈：3m甲酸铵水（1:2.5:6.0:0.3:0.2，% v/v）为优化流动相，检测波长为224 nm。延迟因子（RF）值三种物质的那氟沙星，糠酸莫米松、硝酸咪康唑分别值为0.23，0.70，和0.59。对于销售的配方在准确性方面的回收率分别为98.35–99.76%、99.36–99.65%，和99.16–100.25%的那氟沙星，糠酸莫米松、硝酸咪康唑。可重复性和中间精密度研究的汇集相对标准偏差被认为是三个目标分析物的第2%条。四个独立的变量，甲醇含量在总的流动相，波长，腔室的饱和时间，和溶剂前面的效果，进行了评价由部分因子设计的鲁棒性测试。在所有的四个因素，在流动相中甲醇体积似乎与其他两药那氟沙星和糠酸莫米松相比具有对硝酸咪康唑的保留因子可能影响显著，因此要仔细控制的重要。总之，一种新颖的，简单的，准确的，可重复的，和强大的高性能薄层色谱法的开发，这将是在这些霜制剂的质量控制中使用。

关键词

分数阶乘设计，HPTLC，咪康唑硝酸盐，糠酸莫米松，那氟沙星lt;喹诺酮类抗菌药gt;;

1.介绍

那氟沙星（ND）、化学（RS）- 9-氟代-8 -（4-羟基-哌啶-1-yl）- 5-甲基-含氧的-1H,5H-吡啶-[ 3,2,1-ij ]喹啉-2-羧酸，是一种强效的抗菌药物。ND尚未在任何药典中正式描述。糠酸莫米松糠酸盐（MF）、糖皮质激素、化学9alpha;，21二氯会beta;- 羟基-16alpha;-甲基3,20-多虑平-l，4-二亚乙基三胺-17-yl-呋喃-2-羧酸盐，用于抗炎、止痒性能和。硝酸咪康唑（MN），是一种抗真菌药物，化学名为（RS）1 [ 2（2,4含甲氧基的二羟二氯二苯甲烷）- 2 -（2,4-二氯苯基）乙基] LH咪唑硝酸盐。它是用来表现出广谱抗菌活性的全身和局部治疗的阴道和局部真菌感染。结合所有这三种药物可作为一个霜已被用于治疗皮肤病的局部。

文献调查显示各种稳定性指示反相高效液相色谱法（HPLC）和MF和MN分光光度法、高效液相色谱法和高效薄层色谱（HPTLC）的所有三种药物的方法单独或联合其他药物和分光光度法和薄层色谱法对这三种药物的单独和组合的同时估计也有报道和然而，一个为ND，MF的同时估计HPTLC法的发展，与MN联合剂型未见报道。最近，HPTLC是广泛用于药物的量化由于维护成本低，降低分析时间，低流动相消耗每样，和最小的样品净化的需要。它有利于样品的自动化应用和扫描板，此外，HPTLC方法最近已提出了包括在各种药典和通过分析设计质量（aqbd）是一种系统的方法的方法开发，以预先确定的目标开始强调方法的理解及其表现，以科学和质量风险管理。aqbd的主要目的是减少测量中的变化通过控制影响方法的性能从而导致实验室研究各种因素，保证重复性变化较小。实验设计（DOE）是aqbd，包括使用实验设计的一个组成部分，通过方差分析生成的数学模型，和图形表示，显示因素和响应之间的关系和因此，实验设计是需要研究的影响，先前确定的影响因素的方法，定义一个强大的aqbd设计空间里的方法可以在任何地方操作区域。在实验室研究方法的传递和再现性是aqbd潜在的好处和本研究着重于分式析因设计测定系统的鲁棒性分析方法（FFD）。不同的实验设计中，FFD作为响应面是非线性响应预测的首选，由于它的灵活性，从实验运行和信息因素的主效应和交互效应相关。因此一种新的、简单的、准确的、可重复的高效薄层色谱方法开发的Nd，MF的同时估计，锰在药物剂型，使用FFD设计鲁棒性测试。因此，本文介绍的Nd，MF的同时估计HPTLC法的发展，锰使用DOE方法的验证方法。

1. 材料和方法

2.1.材料

Nd和MN工作的标准请提供从杂药有限公司、海得拉巴免费样品，印度和MF西普拉有限公司，孟买，印度。所有的溶剂和化学品的使用特点，从默克公司购买，印度。销售冰淇淋配方；bactimax霜（阿旃陀制药有限公司，孟买）在这项研究中使用的是从当地市场采购。

2.2.使用仪器

linomat 5器（卡马格，瑞士）、双槽室（20times;10厘米；卡马格、瑞士）、薄层扫描仪（卡马格IV，瑞士），赢得猫版1.4.6软件（卡马格，瑞士），（linomat微量注射器659.0014、汉弥尔顿–Bonaduz Schweiz，卡马格，瑞士），紫外室（卡马格，瑞士），预涂硅胶60F254铝板（20times;10厘米，100mu;m厚度；默克、达姆施塔特、德国）进行研究。

2.3.标准溶液的制备

ND，MF原液，和MN被精确称量10 mg药物随后在100毫升容量瓶中，用甲醇稀释至标记分别制备甲醇溶解，得到浓度为100mu;g／mL，这mu;液适当稀释后用甲醇钕，MF获得工作标准溶液，和MN。

2.4.色谱发展与扫描

标准溶液与样品溶液的适宜量应用于高效薄层板，10毫米和15毫米从底部在6毫米波段长带形式的侧边涂硅胶60F254铝板、（10times;10厘米）100mu;m厚度；使用卡马格linomat V样装置。流动相：甲醇：乙酸乙酯：甲苯：乙腈：3m甲酸铵水（1:2.5:6.0:0.3:0.2，% v/v）和色谱运行长度为8.5厘米。移动相组件混合使用前和开发室留下饱和与流动相蒸汽为20分钟，每次运行前。开发进行了由上升技术的迁移距离为85毫米。TLC板，然后在空气中的空气干燥器干燥。进行光密度扫描，所有测量均在反射率在224 nm处的吸光度模式，狭缝尺寸（6times;0.30毫米，微），扫描速度20毫米/秒，分辨率100mu;米/步，光滤波器（二阶），滤波器系数（Savitsky golay 7）。辐射源氘灯发射200 nm和400 nm之间的连续的紫外光谱。浓度的药物测定从漫反射光的强度。通过峰面积的线性回归分析评价。

2.5.方法验证

该方法进行了验证，根据ICH指南Q2（R1）的各种参数，包括线性度，精度，准确度，检测限，定量限，特异性和坚固性的评价。峰面积和所有三种药物的浓度之间的线性关系进行了评价，通过使复制的测量的浓度范围内，400 - 2400纳克/频带的Nd和MN，和100 - 600纳克/频带MF分别。使用普通回归分析方法进行线性校验。方差的方差进行了评价由巴特莱特试验的反应。所开发的方法的精度进行评价的重复性和中间精度研究。重复性在同一天和中间精度在不同的日子进行了三个重复的三个不同的浓度（800纳克，1600纳克，和2400纳克）的Nd和MN和（200纳克，400纳克，和NG）的MF。重复分析一式三份，RSD计算峰面积。确定的方法的准确性，通过执行恢复在三个级别（50%，100%，和150%）。恢复进行了研究，通过扣球三个不同量的Nd，MN，（400纳克，800纳克，和1200纳克）和MF标准（100纳克，200纳克，和300纳克）的剂量形式为Nd和Mn（800纳克/频带）和MF（200纳克/波段）的标准加入法。恢复研究一式三份。按照ICH指南，从对Nd，MF的校准曲线的响应和斜率的标准偏差来计算了方法的检测限和定量限，锰的使用公式，检测= 3.3 *sigma;/ s的极限；定量限为10times;sigma;/在哪里，“sigma;”为响应标准差；和“S”是校准曲线斜率。通过分析标准药物和乳膏剂的峰纯度，确定了该方法的特异性。样品中的Nd，MF，和MN的点被证实通过比较所有的三种药物的RF和光谱与标准。三种药物的峰纯度进行了评估，通过比较光谱在三个不同的水平，即，峰值启动（S），峰值（M），和峰端（E）的位置的斑点。

分析过程的坚固性是指它的能力，以保持不受影响的方法参数的小的和故意的变化。研究坚固性，部分因子设计（FFD）的应用；四因素半部分设计（24minus;1）。在本研究中，四个因素的基础上，试运行期间观察到的临界因素选择色谱的直觉和以往的研究经验，在流动相甲醇体积（A），室饱和时间（B）、（C）、波长和溶剂前（D）。为了定量分析所考虑的反应的偏差，Rf从原来的值，检查的因素的范围被故意改变从最佳的方法设置的所有三种药物。四个因素，他们故意在高和低水平的变化，如表1所示。所有的实验进行随机顺序，以尽量减少偏差的影响，不受控制的因素，根据选定的变量的实验域。进行实验的基础上的实验域和响应记录的保留因子的Nd，MF和MN的形式，以检查该方法的坚固性。

表格1. 在FFD使用的试验因素与水平。FFD = 分数阶乘设计

2.6.市场处方分析

市售制剂（bactimax奶油），测量的奶油（0.5克）相当于1% W / W钕，0.1% w / w的MF和2% w / w的MN转移到100毫升容量瓶中依次加入30 mL甲醇。溶液超声20分钟，体积是由用甲醇超声10分钟，再标记。解决方案是使用滤纸过滤0.45mu;M，和1毫升的进一步稀释至10 mL甲醇。将所得的样品溶液用于色谱开发和扫描，然后通过分析。分析重复一式三份。

2.7.数据分析

实验设计的所有数据分析均采用设计专家破解版本7.0.0进行（STAT缓解公司，明尼阿波利斯，美国）和剩余的统计计算是利用微软进行Excel 2013软件（微软公司，美国）。巴特莱特的试验和缺乏适合的测试被应用在从线性方差和偏差方差线性评价区域的数据。

2.8.结果与讨论

常见的检测波长选择分析为224 nm的所有三种药物在224 nm处表现出最佳的响应。在不同溶剂体系中进行了流动相优化，考察了正己烷、甲苯、甲醇、乙酸乙酯、乙腈、乙醚、氯仿、二氯甲烷。从这些组合的甲醇、乙酸乙酯、甲苯的效果很好的分离，因此，进一步的临床试验启动的不同比例的甲醇、乙酸乙酯、甲苯与不同改性剂如醋酸、氨、甲酸、磷酸、甲酸铵。通过加入乙腈的上述流动相的频带特性得到改善。然而，相当多的前沿观察钕，因此3m甲酸铵添加到减少前置。最后，组成流动相为甲醇：乙酸乙酯：甲苯：乙腈：3m甲酸铵水（1:2.5:6.0:0.3:0.2 % V / V / V / V）尖锐的和对称的峰。定义良好的频带的Nd在RF 0.23 0.02（1200纳克/频带），MF在RF 0.70times;0.02（300纳克/频带），和Mn在RF 0.59times;0.05（1200纳克/频带）时，得到的腔室与流动相在室温下饱和，检测波长为224 nm。钕，MF，和锰表现出良好的测定系数，在给定的浓度范围为400 - 2400纳克/频带的Nd和Mn和100 - 600纳克/频带锰分别。方差的方差是由巴特莱特的试验证实，峰面积对于所有三种药物的反应呈现均匀的方差是由chi;2值小于表列值为例。TLC色谱标准：钕（RF 0.23），MF（RF 0.70）和MN（RF 0.59）。MF =糠酸莫米松；Mn =硝酸咪康唑；Nd＝那氟沙星；薄层色谱法，薄层色谱法。

检出限为ND，MF和MN被发现是9.57纳克/带，7.03纳克/带，和44.77纳克/频带分别。Nd，MF，和MN的定量限被发现是29纳克/带，21.32纳克/带，和135.69纳克/频带分别表示良好的灵敏度的方法（如表格2所示）。所建立的方法的精度进行评价的重复性和中间精度，并表示为峰面积%的RSD。重复性和中间精密度进行三次重复三进行了不同浓度（800 ng/mL，1600 ng/mL和2400 ng/mL，ND和锰，200吴，400 ng和600 ng MF）显示RSD＜2%，表明可接受的精度从重复性的峰面积的测量示例应用程序（表格2）。标准加入法的准确度研究表明，在所有三个级别的百分比恢复在98.35 - 100.25%的范围内，表明常规药物分析方法的适用性和适用性。

表格2.提出了针对Nd，MF的同时估计高效薄层色谱法分析验证参数，和MN。