论文总字数：15228字

摘 要

制备型高效液相色谱仪主要用于产品的制备分离，在药物研究、生产领域等具有广泛的应用，它的高效率、高超载的进样模式，大大的提高了制备分离效率，且在产品纯度、回收率上远超以前的制备方法。超高效合相色谱对于难分离的化合物，有较好的分离度，且运用广泛。本文主要基于制备型高效液相色谱，从制备分离的方法开发，包括梯度聚焦、制备条

件的优化以及方法开发中遇到的峰型、保留期间等问题等深入研究，并结合超高效合相色谱对药物从粗品到纯品的纯化过程。

关键词：高效制备液相色谱；方法开发；分离纯化；梯度聚焦；保留时间

Development and application of preparative high performance liquid chromatography

Abstract

The preparative high performance liquid chromatography（HPLC） is mainly used for the preparation and separation of products, and has a wide range of applications in the field of drug research and production. Its high efficiency and high overload injection mode greatly improves the preparation and separation efficiency, and the product purity and recovery rate is far beyond the previous preparation methods. Ultra-high performance compound chromatography（UPC²） has a good separation degree for the compounds that are difficult to separate, and it is widely used. In this paper, based on preparative high performance liquid chromatography, the preparation and separation method development, including gradient focusing, optimization of preparation conditions, peak type encountered in method development, retention period and other problems were studied in depth, and the purification process of drugs from crude to pure products was combined with ultra-high performance compound chromatography.

Keywords: High Performance Preparative Liquid Chromatography, Method Development, Separation And Purification, Gradient Focusing, Retention Time

目录

第一章 引言 1

1.1高效液相色谱方法的发展过程 1

1.2高效液相色谱仪 2

1.3 分析型和制备型高效液相色谱的区别 4

第二章 制备液相方法开发 6

2.1制备分离的目标和策略 6

2.1.1目标 6

2.2分离策略 6

2.3条件优化 8

2.3.1梯度洗脱 8

2.3.2梯度探索 8

2.4流动相的选择优化 11

2.4.1流动相的选择 11

2.4.2流动相pH优化 12

第三章 方法开发遇到问题 13

3.1峰型差（溶剂效应） 13

3.2产品的保留时间 14

3.3 难分离物质及杂质分离制备 14

第四章 建立制备液相分析方法的一般步骤和试验方法 18

4.1建立制备分析方法 18

4.2样品性质及柱分离模式选择 19

4.2.1样品的溶解性 19

4.2.2样品分子结构和分子特性 19

4.3 制备一般步骤 21

第五章文章总结与展望 23

致谢 24

参考文献 25

1. 引言

1.1高效液相色谱方法的发展过程

高效液相色谱法是近几十年来，发展起来的较为成熟的分析技术，在各个生产中得到广泛的应用。从茨维特（M.S.Tswett）的经典柱液相色谱实验开始^[1]，到近几年，其分析水平越来越高，这些过程都具有非常重要的意义。高效液相色谱法中最重要的是色谱柱，他的粒径经历了40μm→10μm→5μm→3μm越来越小的过程。2004年，Waters公司制造出了用“杂质颗粒技术”（hybrid particle technology）他的粒径高达1.7μm的全多孔球形ACQUITYUPLCTM新型固定相^[5]。2006年以后，2.6～2.76μm表面多孔型粒子（1.7μm熔融硅实心核，0.5μm表面多孔层）出现，成为了当时最热门的色谱柱填料。

进入21世纪以后，由于广大色谱工作者的锐意进取，新方法新技术不断涌现，已经取得最新进展如下^[6-11]：

(1)超高效（压）液相色谱的诞生

2004年美国Wtaers公司在匹兹堡分析化学和光谱应用会议（pittcon会议）上展出了最新研制的ACQUITY超高效液相色谱（Ultra-performance liquid chromatography，UPLC）系统，他使。用“亚乙基桥联杂化”（bridged ethylene hybrids，BEH）技术,创新制备了由1.7μm全多孔球形杂化粒子填充的高效柱（100×2.1mm），配备耐压达103MPa（15000psi）的双柱塞各自独立驱动的往复式串联泵、高速采样装置和由光导纤维传导的紫外吸收检测器，这些高端部件的完美组合构成了柱外效应很小的超高效液色谱系统，实现了高速和高柱效的分析。随后，世界知名的分析仪器制造商纷纷跟进，先后制造出了使用1.7~2.5μm填充的高柱效、耐压高达100~150MPa（15000～22500psi）的超高效液相色谱系统，至今，UHPLC已成为超高压液相色谱的统称。

(2）表面多孔粒子的异军突起

剩余内容已隐藏，请支付后下载全文，论文总字数：15228字