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摘 要

本文通过免疫比浊法研制载脂蛋白E检测试剂盒，实验中通过测试研究来自不同厂家的抗体与缓冲液的最佳配比，并在随后继续进行质控测试，重复性测试，稳定性测试等来确保所配制的载脂蛋白E是符合临床检验的要求的。并且载脂蛋白E的研究也有很大的应用前景，如眼病的预防。本次研究能够为临床的早发现、早治疗提供较为可信的理论和实践依据，也为以后对该实验的优化提供了一些理论和实践基础。

关键词:载脂蛋白E；免疫比浊法；检测试剂盒；缓冲液

Development of Complement Apolipoprotein E Assay kit

Abstract

In this paper, apolipoprotein E detection kit was developed by immunoturbidimetry. In the experiment, the best ratio of buffer solution and antibodies from different manufacturers was tested and studied, and then quality control test, repeatability test and stability test were continued to ensure that the prepared apolipoprotein e met the requirements of clinical test. And the research of apolipoprotein E also has great application prospects, such as the prevention of eye diseases. This study can provide a more reliable theoretical and practical basis for clinical early detection and treatment, and also provide some theoretical and practical basis for the optimization of the experiment in the future.

Keywords: Apolipoprotein E, Immunoturbidimetry, Detection kit,Buffer

目录

摘要 I

Abstract 1

第一章 引言 1

1.1实验基本介绍 1

1.1.1实验设计背景 1

1.1.2载脂蛋白E的多态性 1

1.1.3载脂蛋白E跟动脉粥样硬化的关系 2

1.1.4载脂蛋白E与阿尔兹海默病的关系 2

1.1.5免疫比浊法 2

第二章 实验仪器原料 3

2.1仪器与原料 3

2.1.1实验仪器 3

2.1.2实验原料 3

第三章 试剂配制 4

3.1实验试剂配制方法 4

3.1.1缓冲液的配制 4

3.1.2试剂的配制 5

3.2实验条件 6

3.3校准品 6

3.4检验原理 6

第四章 实验方案及数据处理 7

4.1实验方法和数据记录 7

4.1.1菲鹏抗体的实验操作内容及数据分析 7

4.1.2菲鹏抗体最终的试剂配方确认 14

4.2对比实验数据 14

4.2.1ABM（南京澳林生物科技有限公司）试剂定标 14

4.2.2南方基因定标 15

4.2.3捷门抗体定标 15

4.2.4阿匹斯抗体定标 16

4.2.5数据分析 16

第五章 产品性能测试记录 18

5.1质控的测试 18

5.2血清样本的比对测试 18

5.3稳定性的测试 18

5.3.1稳定性的定义 18

5.3.2稳定性测试的结果 18

5.3.3稳定性测试的结论 19

5.4干扰实验 20

第六章 结论 21

致谢 22

参考文献 23

第一章 引言

1.1实验基本介绍

1.1.1实验设计背景

Shore1973年时在普通人的极低密度脂蛋白即VLDL中首先探索了载脂蛋白E的存在, 研究发现了载脂蛋白E34kDa的分子量 , 他还发现载脂蛋白E在机体中的主要分布区域为VLDL、乳糜微粒及其残骸。载脂蛋白E不仅是LDL受体的配体，也是肝细胞膜CM、VLDL和某些HDL（包括载脂蛋白E）受体的配体，对脂蛋白的代谢有十分关键的效用。就载脂蛋白E而言，其可分为载脂蛋白E3、载脂蛋白 E2和载脂蛋白 E4三种，换句话说也就是载脂蛋白E大体上是有三种异构体的,中国人群的基因频率在三种异构体上分别是0.88、0.05和0.06。另外，载脂蛋白E功能也很丰富，其对神经系统有重要作用，比如对其正常的发育和受伤后的恢复修补过程产生效用, 此外也体现在对其生理和病理的深远作用。其中，异构体之一的载脂蛋白E4是Alzheimer 病的一种独立危险因子。近些年来对转载脂蛋白 E 基因小鼠研究的不断发展深入, 科学家们致力于研究载脂蛋白 E 功能与结构,并继续研究载脂蛋白E在血浆脂蛋白代谢、高脂血症及相关疾病发病机制中的功效，也使载脂蛋白E的研究获得了重要的关键性突破。^[1]

就载脂蛋白E的结构而言，载脂蛋白E基因位于19号染色体长臂13区的两条带上(19q132)。Utermann等人最一开始通过等电聚焦的方法与手段发现了ApoE蛋白的多态性，随后一些年里Zannis和 Breslow等人又对其多态性进一步进行了研究。载脂蛋白E长度大约为3.7kb。它的基因可划分为外显子和内含子，其中前者有四个，后者有三个。^[2]

在百岁老人中易患冠心病的Ace变异是十分普遍的，且纯合子基因型有明显的增多。这些关联提供了不同存活率的遗传效应的例子，并可能指出长寿的年龄依赖性影响。^[3]

1.1.2载脂蛋白E的多态性

在血浆脂蛋白代谢和组织脂质转运中载脂蛋白E起到关键性效用。其中三种等位基因（ApoE2、ApoE3、ApoE4）和他们的产物是多态性的，它们在一些功能特性上也是不同的。另外，某些病理状态的发展中载脂蛋白E也有所影响，例如其中对于冠状动脉易感性，ApoE4也是一个危险因素。^[4]

高脂血症患者的一个遗传性的因素就有很大概率是载脂蛋白E的基因多态性。经过对高脂血症患者血清的分析及研究，其血清中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的水平相较常人是很显著较高的,但是其血清中的载脂蛋白AⅠ、高密度脂蛋白胆固醇的水平相较常人有显著下降。载脂蛋白E3/3型在载脂蛋白E的3种异构体中是较为常见的。载脂蛋白E4等位基因在高脂血症人群里存在的可能性也相较正常更高。^[9]

另外，根据研究表明，载脂蛋白E的基因多态性与冠心病极其严重程度也都是并没有显著相关的。^[10]

1.1.3载脂蛋白E跟动脉粥样硬化的关系

在这二十年中，经过科学家的研究，发现对于动脉粥样硬化（简称As），载脂蛋白E是有一定抵抗效果的,科学家猜测这是由于载脂蛋白E的某些机能（如对外周细胞胆固醇流出的提高或者是清除血浆中含胆固醇脂蛋白的机能）。^[1]

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