摘 要

通滞苏润江片是用于治疗类风湿关节炎等疾病的维药，由诃子肉、秋水仙、番泻叶、西红花、巴旦仁、司卡摩尼亚脂、盒果藤七味药材加工制成。通滞苏润江片对于治疗类风湿性关节炎、坐骨神经痛等疾病均有良好的效果。西红花是通滞苏润江片中的重要组成成分之一，主要含有的西红花苷成分对炎症引起的疼痛具有明显的拮抗作用。

本论文旨在以TLC法、HPLC法为手段，以西红花苷为指标，研究通滞苏润江片中西红花的质量。本实验分为两部分，一采用TLC法对通滞苏润江片中西红花进行定性鉴别，二采用HPLC法测定制剂中西红花苷的含量。

结果表明本课题所建立的TLC法定性鉴别西红花苷时，斑点清晰，分离度高，阴性样品无干扰，专属性、耐用性良好。本课题所建立的HPLC法测定结果显示西红花苷Ⅰ在进样量为44.8184~448.184ng的范围内与峰面积之间的线性关系良好（R²=0.999），平均回收率为100.09%，重复性试验西红花苷Ⅰ为RSD1.38%；西红花苷Ⅱ在进样量为19.404~194.04ng的范围内与峰面积之间的线性关系良好（R²=0.999），平均回收率为101.32%，重复性试验西红花苷Ⅱ为RSD1.17%。结果表明所建立的实验方法专属性强，线性关系良好，准确度、重复性均符合RSD≤2%的要求。所建立的方法可以准确、可靠、合理地鉴别通滞苏润江片中西红花以及测定其中西红花苷的含量，为控制通滞苏润江片中西红花苷质量提供依据，对提高通滞苏润江片质量标准有重要意义。

关键词：通滞苏润江片；类风湿性关节炎；西红花苷；质量标准

Abstract

Tongzhi Surunjiang Tablet is a Uighur medicine used to treat rheumatoid arthritis and other diseases. It consists of scorpion meat, colchicum, senna, saffron, badanren, sikamoniyazhi, and box vine. Processed to make. Tongzhi Surunjiang tablets have good results in the treatment of rheumatoid arthritis, sciatica, and other diseases. Crimson saffron is one of the important components in Tongzhi Surunjiang Tablets. The major component of crocin contains significant antagonistic effects on inflammation-induced pain.

In this thesis, TLC method, HPLC method and crocin as indicators were used to study the quality of Chinese safflower in Tongzhi Surunjiang tablets. The experiment was divided into two parts. One used TLC method to qualitatively identify the middle and western safflowers in Tongzhi Surunjiang tablets, and the other used HPLC method to determine the content of crocin in the preparations.

The results showed that the TLC used in this project established a statutory identification of crocin, with clear spots, high resolution, no negative samples, and good specificity and durability. The HPLC method established in this study showed that the crocin I had a good linear relationship with the peak area in the range of 44.8184~448.184ng injection volume (R²=0.999), and the average recovery rate was 100.09%. The icsuloside I of the test was RSD 1.38%; the crocin II had a good linear relationship with the peak area in the range of 19.404~194.04 ng (R²=0.999), and the average recovery was 101.32%, Repetitive test Crocin II was RSD 1.17%. The results show that the established experimental method has strong specificity and good linearity. Accuracy and repeatability all meet the requirements of RSD ≤ 2%. The established method can accurately, reliably, and reasonably identify the Mid-Western safflowers in Tongzhi Surunjiang tablets and determine the content of crocin in them, and provide basis for controlling the quality of the middle and western broccoli in Tongzhi Surunjiang tablets, and improve the quality of Tongzhi Surunjiang tablets. The standard is important.

Key Words: Tongzhi Surun Jiang tablets; rheumatoid arthritis; crocin; quality standard

目录

第一章 绪论 1

1.1 通滞苏润江片的药理药效 2

1.2 处方分析 2

1.2.1 西红花 2

1.2.2 番泻叶 3

1.2.3 秋水仙 3

1.2.4 诃子肉 4

1.2.5 盒果藤 4

1.2.6 巴旦仁 4

1.2.7 司卡摩尼亚脂 5

第二章 通滞苏润江片中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的质量标准研究 6

2.1 通滞苏润江片西红花苷Ⅰ、Ⅱ薄层鉴别实验 6

2.1.1 实验仪器及试剂 6

2.1.2 标准品及样品 7

2.1.3 供试品溶液的制备 7

2.1.4 对照品溶液的制备 7

2.1.5 阴性样品溶液的制备 7

2.1.6 薄层鉴别 8

2.1.7 专属性考察 8

2.1.8 耐用性考察 8

2.2 通滞苏润江片中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量测定 8

2.2.1 实验仪器及试剂药品 9

2.2.2 色谱条件与系统性实验 10

2.2.3 流动相的选择 10

2.2.4 对照品溶液的制备 10

2.2.5 供试品溶液的制备 10

2.2.6 专属性试验 10

2.2.7 线性关系考察 11

2.2.8 重复性试验 11

2.2.9 加样回收率试验 12

2.2.10 样品含量测定 13

第三章 结果与结论 15

参考文献 16

附录 17

致谢 20

第一章 绪论

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)以滑膜炎为特征，是一种慢性、周身性、自身免疫性的常见临床疾病。临床表现为关节红肿疼痛，从而导致关节畸形、强直和功能障碍，丧失或降低机体功能，抑或残废乃至使生活能力丧失^[1] 。对国内RA患者的调查显示，在人群中女性的发病率较高，并且男女发病的年龄高峰也不同^[2]，女性患者发病年龄高峰在40岁左右，男性患者在60岁左右。患者初期常伴随有发烧、疲惫、身体不适、食欲下降、骨关节发麻、疼痛等症状，严重者会出现肢体僵硬麻木并伴随一定程度贫血；晚期主要表现为关节半脱位、关节严重变形、运动严重困难，最终导致残废，严重损害并威胁着患者的生活质量。该病早期的致病细胞较少,病情易于控制，但随着时间的推移、病情的延长，病情就难以控制，因此要尽早发现并及时治疗，才能有效减少病情带来的损害。目前，该病的发病机理还未完全清楚，更多的是认为与遗传、和环境有表较大的关系。

目前对于此病没有有效的根治方法，但可以采用一些措施用来缓解该病情，减少病症带来的疼痛，如针灸、按摩、手术措施、药物治疗等。由于针灸和手术治疗的复杂性和不确定性，药物治疗便成为当前主要的治疗方法和研究方向。当前服用的药物主要是中药和西药两大类。西医理论主要依据类风湿性关节炎的病理表现，在用药上主张缓解疼痛、消除关节炎症、修复已被损坏的关节部位等。国内临床上常用的药物为非甾体抗炎药^[3]、慢作用抗风湿药、糖皮质激素及其他消炎性西药之间的配合使用。这其中应用最为广泛的是非甾体抗炎类药物，因为非甾体抗炎药物中含有的花生四烯酸不仅能够抑制环氧化酶物质的活性^[4]，同时还能有效控制前列环素、血栓素、前列腺素的生成，减少这些炎症介质的产生，达到消炎并缓解疼痛的效果。风湿性疾病治疗是一个长期过程，而目前用于治疗该病的西药均存在较大的不良反应，长期服用会损害上消化道和肝肾功能，在治疗该病的同时也给自身健康带来了其他的风险。因此采取其他不良反应小的药物成为当下的趋势。

中医历史悠久，早在2000多年前就提出了关于类风湿性关节炎的医治手段。中医在治疗此病历史中，已经积累了极其丰富的经验，中医认为类风湿性关节炎是因为湿热毒邪侵入人体，人体肌肉、骨骼、气血腐蚀，使痰浊和瘀血交汇阻塞在筋骨之中，凝滞不散，血脉经络阻塞不通造成的。因此中医认为活血通於是治疗类风湿性关节炎的重点。目前我国中药治疗风湿病大多集中在两个方面，一方面是中药单体和提取物^[5]，把从药物中分离出的有效成分，经过提炼加工得到高纯度的单体中药，市场上使用较多的就是雷公藤多苷和白芍总苷等。另一方面是复合型药物，将有抗RA作用的药物经过处方配伍制成有效的复合药物。此方法加工制成的复合制剂可大大降低药物副作用，控制药效发挥速度，而且也可以明显的控制血药浓度，使其保持在有效合理的状态。基于这种情况，中药相对西药更有优势，中药能发挥方剂中各种有效成分的协同作用，抗炎镇痛的同时能够调节免疫作用，提高病情治疗效果，减少不良反应。因此我国在类风湿性关节炎的临床治疗时，十分重视中药的使用。

通滞苏润江片便是中药治疗类风湿性关节炎的一个成功代表，是经过数百年的实际经验考察并优化后流传下来的。该制剂由秋水仙、诃子肉、司卡摩尼亚脂、西红花、盒果藤、巴旦仁、番泻叶组成，其中西红花能够促进血管的扩张，滋养心脏，清心，提高心脏收缩压，并且调节心律，活络血脉，打通阻瘀^[6]。西红花苷是西红花中的有效活性成分，可以明显的减轻炎症引起的疼痛作用，因此西红花可以大大提高通滞苏润江片对类风湿性关节炎疾病的治疗效果。现在国内对通滞苏润江片的研究主要集中于其对类风湿性关节炎的疗效作用,但对其质量标准的研究不多。而对于西红花苷的研究，更多的是研究西红花苷的药理作用，方向单一，并未对其质量标准进行充分研究。

西红花作为通滞苏润江片处方中极其重要的组成成分之一，其独特的药理作用直接影响着通滞苏润江片治疗风湿骨痛的药效作用，因此控制通滞苏润江片中西红花的质量对控制通滞苏润江片的质量有着十分重要的意义。

1.1 通滞苏润江片的药理药效

通滞苏润江片由西红花、番泻叶、秋水仙、诃子肉、盒果藤、巴旦仁、司卡摩尼亚脂七味药材组成，具有开通阻滞，活血化瘀，消肿止痛的功效^[7]。

一、该药物的活性成分具有较强的温经通络，活化血液的作用，能够打通体内阴寒凝滞的脉络，改善局部血液循环，消散体内瘀血，使关节、肌肉的供氧恢复，减轻水肿，从根本上缓解疾病所带来的疼痛。

二、活化成骨细胞。通滞苏润江片能够促进骨髓细胞分化成骨细胞，促进成骨细胞线粒体的能量代谢，提供成骨细胞活化所需要的相关酶，从而促进血钙向骨钙转移，促进骨质形成，从而纠正骨质疏松。

1.2 处方分析

1.2.1 西红花

西红花又叫藏红花、番红花，是鸢尾科多年生的草本植物。本品来源于植物鸢尾科番红花(Crocus sativus L.)的干燥柱头。西红花原产于德国、法国、希腊等地中海沿岸国家，在我国、日本、印度也有种植。

西红花中含有多种化学成分，黄酮类成分主要包括黄酮醇及苷类，黄酮及其苷类；挥发油类主要包括番红花醛；萜类成分是西红花中含量最高的,包括单萜类、二萜类、三萜类 ，其中二萜类是萜类中量最高的一类化合物，也是西红花最重要活性组分之一。西红花苷Ⅰ西红花苷Ⅱ都属于二萜类。

在我国传统医学中，西红花具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神的作用，常用于治疗胃痛、月经不调等，常作为女性的专用补品。近年来国内外学者对西红花进行了大量研究，发现了许多现代临床药效，例如抗肿瘤作用、抗心血管脑血管疾病、对中枢神经系统疾病、保护肝胆。西红花作为一味具有活血化瘀作用的传统药物，能使血管扩张，使毛细血管通透性增加，加快血流速度，改善局部血液循环，使炎症渗出减少且促进炎症的吸收，并通过干扰免疫系统而达到抗炎目的。并且西红花中的主要成分西红花苷对炎症引起的疼痛具有明显的拮抗作用，可以提高通滞苏润江片对类风湿性关节炎疗效。此外据报道西红花的提取物对血液凝固有明显的抑制作用^[8]，延长凝血酶原生成时间和延长活化凝血酶原时间，抑制由胶原引起的血小板聚集。

1.2.2番泻叶

番泻叶是一味被广泛使用的中药材，引入中国后因其独特的药理作用，在近现代被广泛入药。在使用过程中，得到了广泛的认可，之后被纳入我国中药理论中，出现在各种教材和医书中。番泻叶主要分为狭叶番泻和尖叶番泻^[9]，其中狭叶番泻原产于印度，尖叶番泻原产于埃及，现我国海南、西双版纳等地均有栽培。

番泻叶中所含化学成分较为复杂，但绝大多数属于蒽醌类及蒽醌类衍生物，主要为番泻苷A、B、C、D，芦荟大黄素，游离蒽醌，蒽醌苷，大黄酸葡萄糖苷等，此外番泻叶还含有部分黄酮类化合物（如异鼠李素，山柰素等）、挥发油（如植物醇）和多糖（如丹皮酚多糖）^[10]。番泻叶受其有效成分的影响，其药理作用显示出多方面性，主要表现为抑制细菌繁殖、泻下、止血、解痉挛等。这是由于环境中一些病原体能够感染人体^[11]，机体免疫系统在受到外界刺激后被激活，炎症因子和相关抗体的释放数目大量增加，从而导致该病的发作。这种情况下，番泻叶的抑菌功效便起到很好的治疗作用，它能够抑制这些刺激人体免疫系统的病原体，减少机体抗体产生，从而抑制该病的病情。

1.2.3 秋水仙

秋水仙是一种具有观赏性的植物花卉，是百合科植物。原广泛分布于来欧洲和地中海沿岸等地区。我国从七十年代起从国外引进了种子和球茎，进行培育和繁殖。其花和鳞茎含有多种有效成分，对一些疾病有明显治疗作用，有效成分主要为秋水仙素、2-去甲秋水仙碱等生物碱类成分以及藤黄菌素、β-谷甾醇等非生物碱类成分^[12]。其中生物碱类成分均带有强烈的毒性^[13]，但是并不影响它们的药用功能，如秋水仙碱有着较强的抗炎作用、抑制作用（细胞的有丝分裂），故常用于癌症如乳腺癌、食管癌、肺癌等的治疗以及急性痛风的缓解，此外秋水仙花及球茎还可用于治疗坐骨神经痛和关节炎等。但是含有的毒性使得用药时一定要注意，药物中含有的秋水仙碱含量，否则很容易产生腹泻腹痛、恶心呕吐、食欲下降等中毒现象，通滞苏润江片也要通过科学测量来保证其含量要求。

1.2.4 诃子肉

诃子肉是一种在新疆维吾尔族医学上使用较为频繁的药材，由毛诃子的成熟果实经过干燥加工制得。诃子属植物是外来植物，原主要分布在缅甸等地，后引入中国云南广西等地，果实中海油多种有效成分，大多属于单宁类^[14]，占到总量的20%~40%，主要有诃子酸、诃黎勒酸、没食子酸等，除单宁类成分外，果实中还含有奎宁酸、果糖、诃子素、多酚氧化酶等其他成分。据报道，诃子肉水溶性成分能够抑制痢疾杆菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌等病原体的活性，因而可用来清除引发类风湿性关节炎的各类病原体，减少因这些病原体刺激所引起的病情发作，以减轻类风湿性关节炎引起的病症。

1.2.5 盒果藤

盒果藤是旋花科代表性植物。它是多年生缠绕草本植物^[15]。本药材是取自盒果藤的干燥根茎加工而成。该植物主要生长地区集中于河边干燥平滩地或一些海拔相对较低的村庄附近，分布于热带东非、马斯克林群岛、塞舌尔群岛、热带亚洲至热带大洋洲及波利尼西亚,大、小安的列斯群岛，在我国广东、广西西部、台湾地区也有分布。其中也含有黄酮类、多糖类、萜类等多种化学成分，其中三萜类皂苷还具有保护肝脏的功效。用根和茎加工制成的药材具有除湿，止痰的疗效。而且药效显著，持久，是中医、壮医、傣医和维吾尔医都经常使用的药物。

1.2.6 巴旦仁

巴旦仁是植物巴丹杏的种子。由被叫巴达杏仁、八担仁等^[16]。巴丹杏是一种落叶的小乔木。主要分布于我国的新疆地区及美国、巴基斯坦等地。其种子中还含有大量的油脂，包括油酸（单不饱和脂肪酸）、亚油酸、棕榈油酸，此外还含有较多的粗蛋白(如清蛋白、球蛋白)、氨基酸(包括亮氨酸等人体必需氨基酸、谷氨酸等具有特殊药理作用的氨基酸)、人体必需的常量和微量元素(如K、Ca、Na、Fe)，由此可见巴旦仁的营养价值极高，自古以来维吾尔族人民就将其作为重要的营养品来食用。或是作为药材用来治疗干寒性疾病，常用于干性肺虚咳嗽、记忆减退。视力下降等。记忆其中巴旦仁中还有的蛋白质成分（蛋白酶B）是治疗炎症的活性物质，它可以使蛋白酶的活性降低，从而抑制炎症成分的生成，从而抑制关节炎症等作用，帮助通滞苏润江片抑制关节炎症。

1.2.7 司卡摩尼亚脂

司卡摩尼亚脂原产于巴基斯坦、巴勒斯坦、土耳其等地，后来传入中国，是维吾尔族医学上常用的药物，随着药物种植范围的扩大，和中医理论的融合，逐渐的加入到了中医用药成分中。司卡摩尼亚脂原是一种植物的乳状渗出物^[17]，本品是经过烘干加工制得。其中含有大量树脂成分，树脂中的司卡莫宁是其主要药理成分。

本品主要功效为生干生热，可以帮助清除机体异常体液（黏液质和胆液质），因而可用于治疗由类风湿性关节炎所导致的体内体液异常增加。帮助通滞苏润江片减轻风湿性疾病的病症。进口的上乘质量的司卡摩尼亚脂还具有明目，利尿健胃的特殊功效。

第二章 通滞苏润江片中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的质量标准研究

药品的质量直接关系到药物的疗效和患者的身体健康，故需制定合理可靠地质量标准来控制药品的质量，以保证患者能够安全有效的用药。质量标准的要求包括对通滞苏润江片的的成分进行定性鉴别；含量测定的方法要专属性强、操作简便、重现性好；制剂中含量的测定^[18]，应选取处方中主要成分药物和名贵性药物进行含量测定方法的制定。通滞苏润江片中西红花作为有效成分之一，属于贵重药材，含胡萝卜素类化合物，已被医学确认为生理活性成分，是治疗关节骨痛、类风湿关节炎等的有效成分^[19]。本实验以西红花苷为对照，采用了TLC法进行薄层鉴别，验证该方法的专属性以及耐用性。采用了高效液相色谱法，验证的内容包括专属性考察、线性范围、重复性和准确度。