摘 要

本文首要研究3-MA对斑马鱼胚胎发育的影响，属于发育毒理学的研究范畴。本文首先介绍了斑马鱼及斑马鱼对发育毒理学的优势，接着对本次实验的药物细胞自噬抑制剂3-MA进行了介绍；主要了解3- MA的配制方法和参考实验剂量并且自己能熟练掌握其配制过程，之后引出了该药物对胚胎发育影响所涉及的方面（死亡率、畸形率、孵化率、体长、心跳、血管等），从而确定给药后需要观察的参数。在参考实验剂量的基础上设定含有三到四个不同浓度的浓度梯度，重复多次实验并对其进行验证。每12h进行观察，收集观察记录的数据，用GraphPad Prism5电脑软件分析药物对斑马鱼胚胎发育的影响差异。

关键词：细胞自噬抑制剂 3-MA 斑马鱼

Abstract

The main research of this paper is the effects of autophagy inhibitor 3-MA on embryonic development of zebrafish，which belong to development toxicology. Chemicals’ effects on zebrafish embryonic development have been studied all round. First of all, the superiority of zebrafish in developmental toxicology are introduced in this article.Then,we introduced 3-Methyladenine,which used in this experiment .Before this experimnet,i consulted papers published by previous scholars and research institutes to learn its preparation method and reference test dose.Then the aspects involved in the effects of drugs on embryonic were introduced(mortality,malformation rate,hatching rate,body length,heartbeat,blood vessel) to determine the parameters to be observed after administration.Concentration gradients of three to four different concentrations were set on the basis of reference experimental dose,the concentration experiment was repeated three times in each groups,then put it in the 28℃ incubator and observe it every twelve hours.Finally,the recorded data were collected and analyzed by computer software GraphPad Prism5 to study the difference in the impact of drugs.

Key Words:Autophagy 3-MA Zebrafish

目录

摘要_{……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………}Ⅰ

Abstract_{…………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………}Ⅱ

第一章 文献综述 2

1.1斑马鱼模型的简介 2

1.1.1斑马鱼简介 2

1.1.2斑马鱼的日常管理和繁育 2

1.1.3 斑马鱼胚胎发育 3

1.1.4斑马鱼药物毒性与安全性评估 4

1.1.5 斑马鱼与发育毒理学 5

1.2 细胞自噬抑制剂3-MA简介及相关研究 6

1.2.1 3-MA简介 6

1.2.2 细胞自噬抑制剂方面相关研究 7

第二章 实验材料与方法 8

2.1 前言 8

2.2 材料和方法 8

2.2.1 3-MA样品 8

2.2.2 斑马鱼的养殖 8

2.2.3 实验耗材和试剂清单 8

2.2.4 实验仪器 9

2.2.5 实验方法 10

第三章 实验结果与讨论 13

3.1 GraphPad Prism5及数据处理简介 13

3.2 细胞自噬抑制剂3-MA对斑马鱼生存率和孵化率影响结果 13

3.3 细胞自噬抑制剂3-MA对斑马鱼致畸性影响结果 15

3.4 细胞自噬抑制剂3-MA对斑马鱼体长、心跳影响结果 15

3.5 细胞自噬抑制剂3-MA对斑马鱼血管发育影响结果 17

第四章 结论与展望 19

参考文献_{…………………………………………………………………………………………………………………}20

致谢_{……………………………………………………………………………………………………………………………}22

第一章 文献综述

1.1斑马鱼模型的简介

1.1.1斑马鱼简介

斑马鱼属于体型较小的热带鲤科鱼类，又叫蓝条鱼，集中首要分布在印度和巴基斯坦等热带水域，平均体长平常在为4~6cm左右，其整个身体呈纺锤状，背部为偏深橄榄色，鱼鳃盖到尾巴末端散步着数条银蓝色的纵形条纹，雌性与雄性的颜色略有不同，雌性偏银灰而雄性则偏黄色。鳍部的纵向条纹与身体颜色类似，尾鳍较长并且呈叉字形。外部受精半透明胚胎的高繁殖力，短生成时间和快速发育（斑马鱼孵化一般在受精后七十二小时）等这些特点使斑马鱼成为首选可靠的脊椎动物模型系统，尤其是在发育生物学领域（1.快速生长 2.全年生育力高 3.丰厚的发育生物学布景 4.身材小而透明适合用传统显微镜观察其内脏 5.适合用整体原位杂交和抗体染色 6特异性蛋白的强制表达是通过微注射RNA到早期胚胎中实现的.7.胚胎很容易暴露于化学药物，用量极少 8.适用于观察化学品的直接影响而非代谢物 ）。由于斑马鱼的两条基因序列与人类的两条基因序列相似性很高，因为其在很大程度上表明对斑马鱼所做实验得出的数据对人体普遍适用，所以在同一代鱼身上进行不同实验得以实现，所以斑马鱼模型对于疾病机制的探究非常有益[1]。

1.1.2斑马鱼的日常管理和繁育

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