氧化苦参碱纳米粒的制备及表征开题报告
2020-04-20 13:03:28
1. 研究目的与意义（文献综述）
氧化苦参碱（oxymatrine）是从传统豆科植物苦参、苦豆子和山豆根中分离得到的化合物，是一种具有重要活性的四环喹诺里西啶类生物碱。药理学研究证明氧化苦参碱具有抗炎、抗心律失常、免疫调节、抗病毒等多种药理作用，特别是在治疗病毒性肝炎方面取得良好疗效，临床结果显示对慢性乙型肝炎、丙型肝炎、肝纤维化等具有较好的治疗作用。发现近年研究还发现氧化苦参碱能抑制肿瘤细胞增殖、转移，诱导其凋亡、及向正常细胞分化，具有抗肿瘤的活性。dawei wang等研究了氧化苦参碱治疗可通过调节tgf-β1/ smad3信号通路来防止cpr的作用。yibai xiong等研究了一种慢性氧化苦参碱疗法通过靶向结肠直肠癌细胞中的长非编码rna malat1，诱导抵抗和上皮 - 间充质转变。liqiang qian等研究了氧化苦参碱可以在gbc细胞内抑制pten / pi3k / akt功能通路调控肿瘤发生。jiang liang等研究了氧化苦参碱可能通过抑制滑膜细胞的活化，迁移，侵袭和增殖来保护ra的关节破坏。xian zhang等研究了氧化苦参碱抑制tlr4 / pi3k / akt / gsk-3β信号通路抑制肝细胞凋亡，进而有效改善急性肾衰竭。xiuxiu sang等研究氧化苦参碱对增强免疫力功能和控制hbv抗原的有益效果。
纳米给药系统是指药物与药用材料形成纳米级药物输送系统。纳米系统能够有效提高难溶药物的生物利用度，减少给药剂量，应用前景广泛。由于纳米粒的粒径不同，主要集中的部位亦有所区别。粒径位于100nm～500nm微球多被肝脏摄取,小于100nm、大于50nm的微球能进入肝实质细胞,小于50nm的微球能透过肝脏内皮,或通过淋巴传递到脾脏和骨髓细胞,甚至可通过血脑屏障进入脑组织。可见纳米粒对肝脏纳米给药系统有良好的被动靶向,可使药物高选择性地分布于肝脏,从而降低毒副作用和提高疗效,是实现肝脏靶向的有效手段。在此同时纳米粒具有缓释、保护药物、提高疗效、降低毒副作用等优点,对于治疗各种肝脏疾病具有特殊意义。
肿瘤组织血管丰富，血管内皮细胞间隙较正常组织大，造成大分子类物质和载药微粒容易在肿瘤组织富集；另外，肿瘤组织淋巴回流缺失，造成大分子类物质和脂质颗粒容易在肿瘤组织滞留。这种现象被称为渗透和滞留增强效应（epr效应）。平均粒径在100~200nm的纳米粒可以显著改变药物在体内的组织分布，脂质体通过epr效应在肿瘤组织蓄积，使得肿瘤组织内药物浓度超出正常组织药物浓度20倍，部分甚至达到60倍以上，既降低了对正常组织的毒性同时也显著增强了药物的抗肿瘤活性。
2. 研究的基本内容与方案
| 2.1 研究（设计)的基本内容 对氧化苦参碱进行研究，对氧化苦参碱纳米粒的制备工艺进行研究分析，并对其工艺进行优化，筛选合适制备方法，最后对纳米粒进行表征，对其稳定性能、药物释放性能进行研究。 2.2 研究（设计）的目标 完成氧化苦参碱纳米粒的制备，筛选出合适的氧化苦参碱纳米粒工艺条件，并进行相关的表征，包括纳米粒的粒径、形态、释放。 2.3 拟采用的技术方案及措施 2.3.1 溶剂的配置 标准溶液的配制：精确称取OMT 5mg粉末用纯化水溶解并定容为 100ug/mL的储备液，保存于 5℃。将储备液分别稀释至 2、4、6、8、10、12、14、16、18、20ug/mL系列标准液。 PBS 溶液的配制：精确称取磷酸氢钠0.78g、磷酸二氢钠0.10 g、氯化钠4.10 g，溶于400mL蒸馏水中，用盐酸调节pH值为7.4，加蒸馏水定容至 500m L。 柠檬酸缓冲溶液的配制：精密称取柠檬酸钠2.807g粉末用纯化水溶解并定容为0.1mol/L的柠檬酸钠储备液。精密称取柠檬酸三纳2.41g粉末用纯化水溶解并定容为0.1mol/L的柠檬酸三纳储备液。将不同比例的柠檬酸钠储备液和柠檬酸三纳储备液进行混合，配置出PH=3、4、5的柠檬酸缓冲液20ml。 2.3.2 氧化苦参碱MPEG-PCL纳米粒的制备 将MPEG-PCL共聚物溶解在2ml二氯甲烷溶剂中。采用旋转蒸发法去除二氯甲烷，得到凝胶薄膜。加入5 mL柠檬酸缓冲液，在不同温度条件下水浴孵化。加入氧化苦参碱，0.1摩尔每升的磷酸氢二钠调节外水相pH为7.4继续水浴孵化。采用透析的方式除去未包裹的氧化苦参碱原型药物，得到氧化苦参碱MPEG-PCL纳米粒分散液。采用冷冻干燥法获得氧化苦参碱MPEG-PCL纳米粒冻干粉待用。 2.3.3 氧化苦参碱纳米粒的表征： 采用动态光散射仪测定氧化苦参碱MPEG-PCL纳米粒的粒径大小和分布，所有测试均重复 3 次取平均值。同时采用透射电镜观察纳米苦参碱 MPEG-PC纳米粒结构特征：将所制备的紫杉醇 MPEG-PCL纳米粒分散液滴加在覆盖硝酸纤维素膜的铜网上，在空气干燥后，用 0.5%磷钨酸负染之后进行电镜观察。 2.3.4 载药量和包封率的测定 精确称取5 mg冻干粉，采用0.2 mL纯化水溶解，加入甲醇破乳。通过HPLC测定氧化苦参碱含量。通过以下公式计算药物包封率和载药量： 包封率=纳米粒中氧化苦参碱含量/氧化苦参碱投药量×100% 载药量=纳米粒中氧化苦参碱含量/氧化苦参碱MPEG-PCL纳米粒冻干粉的重量 ×100% 2.3.5 体外释放研究 人体内环境pH值接近7.4，而肿瘤细胞细胞外基质pH偏低，为6.3-6.8之间，肿瘤细胞内含体及溶酶体pH值更低，为pHlt;6。选择pH7.4、6.5和5.0的水溶液缓冲液分别模拟正常血液环境、肿瘤细胞外基质和溶酶体环境。来研究氧化苦参碱的MPEG-PCL纳米粒的体外释药行为。 分别称取10.0mg冻干后的纳米粒粉末，溶解于10mL不同pH的PBS缓冲溶液中，待溶解完后置于透析袋内，封口后置于含有50mL不同pH的释放介质中，在温度为37°G转速为60rpn 的恒温振荡培养箱中进行培养，以此研究其释放行为。分别于0.5、1、2、3、4、6、9、12、18、 24、30、36、40、44、48h取样3mL，同时向体系中补充同体积的新鲜缓冲液维持释放介质体积不变。每组设置三个平行实验。该实验全程在避光条件下进行。 利用HPLC法测定各样品溶液在20.6nm处的峰面积，并代入相应标准曲线计算OMT含量。根据以下公式计算OMT的累积释放百分率Q(%)。并以时间t(h)为横坐标，OMT累积释放量Q(%) 为纵坐标,绘制药物释放曲线。
其中： ——药物释放介质的总体积50ml (mg/l)——时刻点时所取样品的浓度 ——在时所取的样品的体积3ml （μg）——载OMT纳米粒中OMT的含量 |
3. 研究计划与安排
| 第1－2周：查阅相关文献资料，确定研究方案，完成开题报告。 第3-6周：完成氧化苦参碱纳米粒的制备。 第7-12周：完成氧化苦参碱纳米粒的表征。 第13－14周：完成并修改毕业论文。 |
4. 参考文献（12篇以上）
| [1].韩华, 曹苋恺, 殷鑫,等. 氧化苦参碱抗肿瘤作用机制的研究进展[J]. 现代中药研究与实践, 2017(2):78-81; [2].周卿. 氧化苦参碱脂质体的制备和药物动力学研究[D]. 重庆医科大学, 2007; [3].Wang D, Lou X Q, Jiang X M,et al. Oxymatrine protects against the effects of cardiopulmonaryresuscitation via modulation of the TGF-β1/Smad3 signaling pathway[J].Molecular Medicine Reports, 2018； [4].Xiong Y, Wang J, Zhu H, etal. Chronic oxymatrine treatment induces resistance and epithelialmesenchymal transition through targeting the long non-coding RNA MALAT1 incolorectal cancer cells[J]. Oncology Reports, 2018; [5].Qian L, Li X, Ye P, et al.Oxymatrine induces apoptosis and inhibits invasion in Gallbladder carcinomavia PTEN/PI3K/AKT pathway.[J]. Cytotechnology, 2017:1-12； [6].Liang J, Chang B, Huang M, etal. Oxymatrine prevents synovial inflammation and migration via blockingNF-κB activation in rheumatoid fibroblast-like synoviocytes[J]. InternationalImmunopharmacology, 2018, 55:105-111; [7].Zhang X, Jiang W, Zhou AL,等. Inhibitory effect of oxymatrineon hepatocyte apoptosisviaTLR4/PI3K/Akt/GSK-3β signaling pathway:[J]. WorldJournal of Gastroenterology, 2017, 23(21):3839-3849； [8].Sang X, Wang R, Han Y, et al.T cell--associated immunoregulation and antiviral effect of oxymatrine inhydrodynamic injection HBV mouse model[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B, 2017,7(3):311-318； [9].苏婷婷, 傅春升, 张学顺. 苦参碱制剂的研究进展[J]. 中南药学,2016(3):295-299; [10].郑智武. 磁性纳米粒靶向增强氧化苦参碱抗肝纤维化作用初步研究[D]. 第二军医大学, 2008; [11].蔡容巧, 刘苗, 刘道洲,等. 酸敏阿霉素脂质纳米粒的制备及其体外抗肿瘤活性研究[J]. 现代生物医学进展, 2016, 16(7):1238-1244; [12]郑毅, 黄航, 付翠香. 紫杉醇MPEG-PCL纳米粒的制备、表征及其体外释药行为研究[J]. 中国现代应用药学, 2014, 31(9):1093-1097; [13]杨建宏. RGD修饰的氧化苦参碱聚合物泡囊抗肝纤维化作用的研究[D]. 南方医科大学, 2013. [14]李素梅. 氧化苦参碱PEGs脂质体的研究[D]. 哈尔滨商业大学, 2011; [15]蔡容巧, 刘苗, 刘道洲,等. 酸敏阿霉素脂质纳米粒的制备及其体外抗肿瘤活性研究[J]. 现代生物医学进展, 2016, 16(7):1238-1244. |
