摘 要

酶固定化最为重要的目的，就是延长酶的使用寿命以及提高酶的稳定性以提高工业效率和降低成本。在酶固定化过程中，氨基功能载体受到载体理化性质，酶在载体内部或载体表面分布等影响，固定化酶的性能会不定向发生一些改变。本文主要探究了pH，酶浓度，温度和时间等对氨基树脂固定核酸酶P1的影响，以及对氨基树脂表面进行修饰，观察其固定化酶的效果。

通过实验发现：pH，酶浓度，温度和时间等不同条件对氨基树脂固定核酸酶P1都有较大影响，但都可以找出相对最适环境以求较高效率。同时，氨基树脂与戊二醛交联后固定酶的效果要好于其直接固定酶。而氨基树脂后交联戊二醛的效果最好，这表明戊二醛后交联在一定程度上改变了氨基树脂固定核酸酶P1的结构，提高了效率。

关键词：氨基树脂 固定化酶 核酸酶P1 戊二醛 交联

Effect of Surface Modification of amino resin immobilized enzyme

Abstract

The most important purpose of Enzyme immobilization is extending the life of the enzyme and improving enzyme stability to improve industrial efficiency and reduce costs.In the immobilization process,because the impact of carrier physicochemical properties and the enzyme’s distribution in carrier’s internal or surface to amino functional carrier, the performance of immobilized enzyme will change unidirectionally.This paper explores the impact of pH, enzyme concentration, temperature and time to the amino resin fixing nuclease P1 .And I modificated amino resin’s surface to observe the effect of immobilized enzyme.

Through experiments I found that different conditions of pH, enzyme concentration, temperature and time have a greater impact to amino acid resin fixing enzyme P1.Simultaneously,it has a better effect if amino resin crosslinked with glutaraldehyde before enzyme immobilization instead of amino resin immobilizing enzymes directly.In addition,another approach,amino resin immobilizing enzymes firstly and than crosslinking with glutaraldehyde,is the best efficient.This means glutaraldehyde interference the amino resin immobilizing enzymes.

Key words:amino resin;immobilized enzyme;nuclease P1;glutaraldehyde;cross-linking

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 4

1.1 氨基功能载体固定化酶的研究进展 4

1.1.1 氨基功能载体制备 5

1.1.2 氨基功能载体固定化酶 6

1.1.3 氨基功能载体固定化酶研究的目的与意义 7

1.2 核酸酶P1研究进展 7

1.2.1 分子结构以及作用机制 7

1.2.2 催化特性，影响因素和纯化 8

1.2.3 工业生产 9

1.3 固定化核酸酶P1应用于5’一核昔酸生产 10

1.4 氨基树脂 10

1.4.1 氨基树脂的性能 10

1.4.2 氨基树脂合成的原料以及原理 11

1.5 戊二醛的性质及戊二醛交联法 11

1.5.1 戊二醛 11

1.5.2 戊二醛交联法 11

1.6 本文的研究意义及研究目的 12

第二章 实验方法与器材 13

2.1 实验材料 13

2.2 实验仪器 14

2.3试验方法和内容 14

2.3.1溶液配制 14

2.3.2氨基树脂的处理（活化） 15

2.3.3酶的固定化 15

2.3.4酶学性质分析 16

2.3.5固定化酶重复利用性能检测 17

2.3.6连续酶解 17

第三章 结果与讨论 19

3.1 氨基树脂微观结构分析 19

3.2 蛋白质标准曲线 19

3.3 氨基树脂固定核酸酶P1最适条件研究 20

3.3.1酶液pH对核酸酶P1固定效果的影响 20

3.3.2给酶量对核酸酶P1固定效果的影响 21

3.3.3 酶浓度对核酸酶P1固定效果的影响 22

3.3.4 固定时间对核酸酶P1固定效果的影响 22

3.5 氨基树脂固定核酸酶P1酶学性质研究 23

3.5.1 酶催化活性影响因素的考察 23

3.5.2 不同形式酶的催化动力学曲线比较 24

3.5.3 HA树脂不同方法固定核酸酶P1的重复利用性 25

3.6 HA树脂固定核酸酶P1柱连续催化反应 25

3.6.1核苷酸分析方法 25

3.6.2固定酶连续催 26

第四章 结论与展望 28

4.1结论 28

4.2展望 28

参考文献 29

致 谢 31

第一章 文献综述

1.1 氨基功能载体固定化酶的研究进展

所谓固定化酶，就是载体能够限制酶的活动区域范围，但是不影响酶本身的催化反应的效应功能，而且可以将酶反复回收利用^[1]。传统固定化酶的方法有很多，主要包括交联，吸附和包埋等。有一种方法从二十世纪60年代开始成为酶固定化的重要方法，就是共价结合法，因为此法能够让载体和酶结合的更加牢固。共价结合的原理：载体表面的特性功能基团与酶表面活性氨基酸残基通过化学反应结合在一起。需要先活化载体或酶上的相关官能团，是实现共价结合的第一步，然后再和载体或酶发生共价结合。因此，共价固定化酶的效果很大因素上要取决于载体活性功能基的反应特性。

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