1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

意义：食品安全问题成为现代食品工业中的重要问题，特别是食品的保质期以及应用于食品中的添加剂和防腐剂的安全性问题[1]，如何防止食品腐败变质和开发安全的食品防腐剂越来越受到重视。

研究表明，某些化学合成防腐剂存在一定的安全隐患，如苯甲酸盐可能会引起食物中毒现象，硝酸盐和亚硝酸盐可能会生成致癌的亚硝胺。

而微生物防腐剂如 nisin、natamycin等因其安全性高、性能好[2]，而且不影响食品风味，在食品防腐方面具有很高的应用价值。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：通过筛选具有拮抗食品腐败菌的微生物菌株是开发防腐剂新产品的先决条件，而对其发酵条件的优化是产品开发的基础。

基于以上研究背景，本课题筛选对食品腐败菌（假单胞菌等）具有拮抗作用的微生物菌株，旨在为构建和丰富防腐微生物种质资源库提供菌种来源，并通过探明抗性菌株最佳的发酵条件，为抗菌活性物质的人工合成奠定基础，并为相关企业开发微生物防腐剂新产品提供参考和依据。

研究内容：本实验的研究内容主要体现在以下两个方面（以第二方面为主）：（1） 采集土壤样品，分离出食物腐败菌的拮抗菌，再进行复筛，获得适应性强、生长 速度较快的拮抗菌；并进行拮抗菌的形态特征、生理生化特性鉴定。

3. 研究的方法与方案

研究方法和方案：1、食物腐败菌拮抗菌的筛选：1.1采集土样；1.2利用点样法对食物腐败菌拮抗菌进行初筛；1.3对食物腐败菌拮抗菌进行对峙复筛；1.4拮抗菌的鉴定：观察菌株菌落形态、用革兰氏染色法观察菌株菌体形态、菌株的生理生化特征鉴定。

2、食物腐败菌拮抗菌发酵条件的优化：2.1拮抗菌培养基组分的优化：2.1.1不同碳源及最佳碳源不同浓度对拮抗菌生长的影响：用葡萄糖、蔗糖、果糖、木糖、乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、麦芽糖分别代替基础培养基中的碳源，加入量为1%，灭菌后接种7%的种子液，培养条件为装液量50 ml/250 ml，30 ℃、180 rmin-1摇床培养48 h，每个处理设3个重复，测量菌液od600值，得出最佳碳源；改变最佳碳源的浓度为0.5%、1.0%、1.5%，培养条件和检测方法不变，得出碳源的最佳浓度。

所得数据应用spss19.0进行单因素方差分析。

4. 研究创新点

食品的生物防腐具有高效、无毒害等特点，蕴含巨大的发展前景，筛选食物腐败菌的拮抗菌是首要的任务。

但同时具有高拮抗活性、快速生长的商品拮抗菌及其抗菌物质还很缺乏。

本课题将获得同时具有高拮抗活性、生长速度快的食物腐败菌拮抗菌株，从而为后续抗菌物质的分离鉴定研究打下良好的基础，为生物防治食物腐败提供高效菌株和使用技术。

5. 研究计划与进展

2014年1月-2014年2月中旬采集土样，在实验室学习并掌握土壤样本中拮抗菌的分离、纯化、分类和培养等实验技术和工作流程，并深入学习相关理论知识，为接下来的研究工作打好基础。

2014年2月中旬-2014年3月初对食物腐败菌的拮抗菌进行初步筛选，并对初筛菌株进行复筛。

2014年3月初-2014年4月底 通过优化食物腐败菌拮抗菌的发酵条件，如培养基组分、培养条件，并进行正交试验，探究出拮抗菌最佳的生长条件。