1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

关于热应激，目前我国大部分的养殖场均采取人工措施来对奶牛进行防暑降温工作。然而夏季高温的条件下还是无法让奶牛完全适应环境，从而影响着奶牛的生产生殖等方面。与此同时，随着国内外对mirna逐步的系统研究，证明mirna参与动物细胞的增殖、分化、凋亡和应激反应等许多生命过程。但有关热应激对奶牛血清中差异表达的所有mirna尚没有确定。本课题的意义在于寻找出标志奶牛发生热应激的重要标志物，进而将筛选出的mirna作为奶牛热应激的重要标志因子，以助于对奶牛发生热应激之前做好更加充分的防御工作。

参考文献：

2. 研究的基本内容和问题

研究内容：

1.以奶牛血清为实验材料，分别提取热应激血清以及正常血清中的总rna。

2.对总rna纯化后进行mirna高通量测序。3.采用lowess方法对数据进行归一化（normalization），并基于归一化后数据进行t-test和cluster分析，筛选出不同血清中差异表达的mirna。

3. 研究的方法与方案

技术路线：

1.采取热应激和非热应激状态下的泌乳期荷斯坦奶牛外周血样

2.离心收集奶牛血清，由联川生物公司对mirna进行高通量测序

4. 研究创新点

本研究以热应激奶牛血清和正常奶牛血清为试验材料，采用高通量测序技术筛选出两种不同血清中差异表达miRNA，选择4个在热应激血清中差异表达的miRNAs进一步验证分析。分析热应激奶牛血清和正常奶牛血清差异表达miRNAs，通过数据对比筛选出可能对应激以及免疫反应起重要调控作用的miRNAs。

5. 研究计划与进展

2013.11.1.-2013.12 .1 方法学习摸索 试验准备 2013.12.1-2014.1.1 样品的采集，总RNA的提取 2014.1.1-2014.2.1 高通量测序实验 2014.2.1-2014.3.1 差异表达MiRNA的筛选， 2014.3.1-2014.4.1 荧光定量PCR实验验证，数据整理及分析 2014.4.1-2014.5.31 实验的完善及论文撰写