1. 研究目的与意义

胰岛素（insulin）是治疗糖尿病的特效药物。

重组赖脯胰岛素（insulin lispro , il）是应用基因重组技术生产的生物工程药物，具有与人内源性胰岛素相似的结构和生物学活性。

由于il生产工序多，周期长，对生产各阶段的准确监控是提高产品收率保证产品质量的前提，其中，胰岛素原残留亦是胰岛素产品质控的主要指标之一。

2. 文献综述

重组人胰岛素及类似物生产和胰岛素前体杂质检测技术摘要：胰岛素是治疗糖尿病的一类重要药物。

本文通过介绍重组人胰岛素及其类似物的特点，并对其生产过程中残留胰岛素前体杂质检测技术研究进行一定的分析。

关键词：糖尿病；重组人胰岛素；胰岛素类似物；胰岛素前体残留；检测糖尿病（diabetes mellitus）是由于体内胰岛素相对或绝对分泌不足，或因胰岛素的生物效应降低，而引起糖、脂肪和蛋白质代谢异常的一种慢性终身性疾病，其并发症包括心脑血、管病变、肾衰竭、视网膜病变、足溃疡、感染以及神经系统障碍[1]。

3. 设计方案和技术路线

一、研究方案1、赖脯胰岛素原单克隆抗体的制备赖脯胰岛素原按免疫程序经腹腔接种balb/c小鼠，制备免疫脾b淋巴细胞，与骨髓瘤细胞sp2/0融合，经选择性培养、间接elisa法筛选和亚克隆，建立分泌抗赖脯胰岛素原特异性抗体的杂交瘤细胞株；将上述杂交瘤细胞注射balb/c小鼠腹腔内诱生腹水单抗，纯化腹水单抗，研究其相关生物学特性，包括抗体分型、特异性、亲和力等。

2、单克隆抗体纯化与酶标记采用辣根过氧化物酶（hrp）标记单抗，并对标记单抗进行质量鉴定，包括：标记率、偶联比和酶标抗体效价。

3、赖脯胰岛素原免疫分析方法的建立与确证 优化包被抗体和酶标抗体的工作条件，建立以抗赖脯胰岛素c肽单抗作为包被抗体，抗赖脯胰岛素a链或b链酶标单抗作为检测抗体的赖脯胰岛素原定量分析法，并对上述方法进行确证，包括：检测限与线性范围、精密度、准确度和特异性。

4. 工作计划

1、2022.1.8-2022.2.1：选题、查阅文献、撰写开题报告。

2、2022.2.2-2022.3.1：免疫小鼠、细胞复苏与准备。

3、2022.3.2-2022.4.5：细胞融合、筛选、亚克隆。

5. 难点与创新点

1、rLPI单克隆抗体的研制成功为IL生产质量控制和高纯度IL制备提供了新的检测技术。

2、胰岛素原（proinsulin, PI）单克隆抗体的研制成功为重组人胰岛素（recombinant Human insulin, rHI）及其相关类似物产品质量控制提供了新的检测技术。