1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、项目主要内容

1.1 课题研究背景

狂犬病（rabies）一种全球性疾病，全球每年超过59000人死于狂犬病，其中大约95%来自于亚洲和非洲的发展中国家[1]，对于我国是一种不可忽视的公共卫生和免疫预防问题。患病动物的咬伤和抓伤是经典的传播途径，病毒可以感染机体的中枢神经系统（central nervous system, cns），导致进行性、急性、不可逆性的致死性脑脊髓炎[2]。随着病毒学学科的发展和现代生物技术的兴起，人们对狂犬病病毒的认识也更为深入，在该病的防控诊断、疫苗研发等方面都具有一定的进步，但是对于许多狂犬病病毒毒株的生物学特性研究仍不够全面。

2. 研究的基本内容和问题

2.实验方案

2.1 研究的目标和内容

从发病犬的脑组织中进行抗原的分离与鉴定，用细胞培养狂犬病病毒后采取分段rt-pcr的方法，对所分离的街毒株进行序列扩增，将获得的各基因片段进行分子克隆后测序，得到全基因组的片段序列。

3. 研究的方法与方案

2.3 实验方案和技术路线犬脑组织处理并通过免疫所组化实验进行病毒阳性诊断 鼠脑组织提取病毒rna后进行反转录 利用预先设计好的引物用高保真pcr方法扩增病毒各基因片段 pcr产物胶回收后连a尾 连接pmd-18t载体后转化至预先制备的感受态细胞中转化 在含有氨苄抗性的固体培养基中进行培养 挑菌后进行阳性克隆鉴定 挑出阳性结果的细菌放入液体培养基中扩增培养 送到公司进行测序 测序结果分析2.4 可行性分析实验步骤均是平时有练习、实践过的步骤，本人具备扎实的操作基础，并了解了上述实验流程，同时本人具有吃苦耐劳的精神，能够按时完成设立的实验目标，撰写实验论文。

课题导师长期致力于人畜共患病毒性疾病综合防控技术研究，在分子流行病学调查、病毒感染以及跨宿主传播机制等方面，从理论到实践，取得了一系列创新性成果，拥有扎实的病毒学理论和实验能力。

为项目的实施提供可靠的技术和理论保障南京农业大学免疫研究所具有良好的科研环境和精良的仪器设备，我所在的实验室的生物安全等级符合既定标准。

4. 研究创新点

狂犬病（rabies）是由狂犬病病毒（rabies virus）引起的一种人兽共患的自然疫源性疾病，人感染后的发病率和死亡率为100%。

经历了多年的发展，人们对狂犬病病毒的认识也更为深入，但对该病毒的认知和研究仍然处于一个未满足的状态。

基于一定数量的全基因组序列的测定可以帮助研究宿主特异性的病毒特征、揭示病毒遗传变异的规律甚至可以分析疾病流行病学和监测狂犬病的存在与发生。

5. 研究计划与进展

2.6 研究计划①一周中周一至周五做实验，时间段为早上9点至11点30分，下午时间段为2点30分至5点30分，晚上时间段为7点30分至9点30分。

周六周日的空余时间撰写研究计划和实验思路，反思一周中需进步的空间。

②通过ncbi上的基因库寻找被在中国狂犬病病毒感染的犬的全基因组序列，通过megalign软件比对，设计出此次实验合适的引物序列。